亚盐的测定

1亚盐得测定(盐酸蔡乙二胺法) 1、1原理

样品经沉淀蛋口质、除去脂肪后，在弱酸性条件下，亚盐与对氨基苯磺酸 (H：N—CeH -SOsH)重氮化，产生重氮盐，此重氮盐再与偶合试剂(盐酸蔡乙二胺)偶 合形成紫红色染料，其最大吸收波长为550nm,测定其吸光度后，可与标准比较定 量。

2HCl+NaN02 + H2N-<^^-S03H

2HC1 - H2NH2CH2CHN-<>

盐酸蔡乙二胺

<0

+ Cl-N-<^^>-SO3H 空

S03H + HC1

2HC1 • H2NH2CH2CHN- -N= N-^>-紫红色

1、2仪器与试剂 1、2、1仪器

① 小型粉碎机。 ② 分光光度计。 ③ 25ml具塞比色管。

1、2、2试剂

① 氯化钱缓冲溶液:在1 000ml容量瓶中加人500ml水,然后准确加入20、

0ml盐酸，振荡混匀后，再准确加入50ml氢氧化鞍，用水稀释至刻度。必要时用

稀 盐酸与稀氢氧化钱调试pH至9、6〜9、7o

② 硫酸锌溶液(0、42mol/L):称取120g硫酸锌(ZnSO,・7H：0),用水溶解, 并

稀释至1000ml o

③ 氢氧化钠溶液(20g/L):称取20g氢氧化钠用水溶解,稀释至1 000ml。

④ 对氨基苯磺酸溶液:称取10g对氨基苯磺酸，溶于700ml水与300ml冰 乙

酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。

⑤ 盐酸蔡乙二胺溶液(lg/L):称职0、lg盐酸蔡乙二胺，加60%乙酸溶解 并

稀释至100ml,混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，1周内稳定。

⑥ 显色剂:临用前,将盐酸蔡乙二胺溶液(lg/L)与对氨基苯磺酸溶液等体积混 合。仅供1次使用。

⑦ 亚钠标准储备液:准确称取250、Omg于硅胶干燥器中干燥24h得

亚钠，用水溶解后移入500ml容量瓶中，加100ml氯化钱缓冲溶液，用水稀释 至刻度，混匀，在4°C避光保存。此溶液每毫升相当于500 u g得亚钠。

⑧ 亚钠标准使用液:临用前，吸取亚钠标准储备液1、00ml,置于

100ml容量瓶中，加水稀释至刻度,混匀。此洛液每毫升相当于5、Oug得亚 钠。

1、3操作步骤 1、3、1样品得处理

称取约10、00g(粮食称取5、00g)经绞碎混匀得样品，置于250ml烧杯中，力口。

70ml水与12ml氢氧化钠溶液(20g/L),混匀，用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH 至&定

量转移至200ml容量瓶中，加10ml硫酸锌溶液，混匀。如不产生白色沉淀, 可再补加2〜5ml氢氧化钠溶液，搅拌混匀。置60°C水浴中加热10min,取出后冷 至室温，加水至刻度，混匀。放置0、5h,用滤纸过滤，弃去初滤液20ml,收集滤液 备用。

1、3、2亚盐标准曲线得绘制

吸取0、0、0、5、1、0、2、0、3、0、4、0、5、0ml亚钠标准使用液(相 当于 0、0、2、5、5、0、10、0、15、0、20、0、25、Oug 得亚钠)，分别置 于25ml具塞比色管中。分别加入4、5ml氯化鞍缓冲溶液,2、5ml60%得乙酸, 然后立即加入5、0ml显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min,用lcm比色 杯(灵墩度低时可换2cm比色杯)，以零管调节零点,于波长550nm处测吸光度，绘 制标准曲线。

1、3、3样品得测定

吸取10、0ml样品滤液于25ml具塞比色管中，按标准曲线制备程序，自“分 别加入4、5ml氯化钱缓冲液”起依法操作。同时做试剂空白。

1、4结果计算

X — 加？ X ] OOP 心X冷X】000

V]

式中：

X—样品中亚盐得含量,mg/kg;

nu—样品得质量,g;

m：—测定用样液中亚盐得质量，P g; V’一样品处理液得总体积,ml; V：—测定用样液体积,ml o

结果以算术平均值得二位有效数字表述。

亚钠含虽的标准曲

V=2O.81x-0.016 R2 = 0.990 ♦亚钠复/pg

一纯性（亚钠量/

OD538nm 0 1 0 0.10 2 0.2Q 3 0.30 4 0.40 5 0.50 样1 样2 才昭于亚6淳竣锂屋 心 0 1.0 2.0 / 3.0 4.0 5.0 / / / 0.4%对氛呈责 1.00 / 1.00 / 1.00 / 1.00 0.05 1.00 0.05 1.00 1-00 1.00 $58^3 3—5miii 0.50 0.50 0.50 0 .50 0J 0 O.f io O.f 0 0.50 加1水至詡虞碎箝贸\"mln 0

0.024 0.048 0.077 0.102 0.114 0.065 0.06S 1> 5说明及注意事项

硫酸锌溶液作为蛋白质沉淀剂使用，也可用亚铁亂化钾与乙酸锌得混合 溶

液,利用产生得亚铁氤化锌与蛋口质共沉淀；实验中使用重蒸水可以减少试验 误差。

2盐得测定 2、1原理

样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，将样品提取液通过镉柱,使其中得

根离子还原成亚根离子。在酸性条件下，亚根与对氨基苯磺酸重氮化后, 再与盐酸荼乙二胺偶合形成红色染料，经比色测得亚盐总量，从还原前后亚 盐量即可求得盐得含量。

2、2仪器与试剂 2、2、1仪器 (1)镉柱

a、海绵状镉粉得制备:投入足够得锌皮或锌棒于500ml200g/L得硫酸镉 溶

液中，经3〜4h,当溶液中得镉全部被锌置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出残余 锌皮，使镉沉底，倾去上层清液，以蒸懈水用倾斜法洗涤，然后移入组织捣碎机中， 加500ml水。捣碎约2s,用水将金属细粒洗至标准筛上，取20〜40 L1之间得部分。 置试剂瓶中，用水封盖保存,备用。

b、镉柱装填:如图8—3所示。用蒸镭水装满镉柱玻璃管,并装入2cm高得玻 璃

置示意图

柱玻璃管,也可用25ml酸式滴定管代用。

棉作垫。将玻璃棉压向柱底，并将其中所包含得空气全部排出，在轻轻敲击下加 入海绵状镉至8〜10cm高,上面用lcm高得玻璃棉覆盖，上置一个储液漏斗，末端 穿过橡皮塞与镉柱玻璃管紧密连接。

2、2、2试剂

好后，先用25ml盐酸(0、lmol/L)洗涤,再以蒸镭水洗2次,

n时用水封盖，随时都要保持水平面在镉层之上，不得使镉层

〈使用完毕后，应先以25ml盐酸(0. lmol/L)洗涤，再以水洗2

① 氨缓冲溶液（PH9、6〜9、7）:量取20ml盐酸加50ml蒸镭水，混匀后

加 50ml氨水，用水定容至1 000ml。

② 稀氨缓冲溶液:取50ml氨缓冲溶液，用水定容至500mlo ③ 对氨基苯磺酸溶液（4g/L）。 ④ 盐酸蔡乙二胺溶液（2g/L） o

⑤ 盐酸溶液（0、lmol/L）:吸取8、4ml盐酸，用水稀释至1 000mlo ⑥ 钠标准储备液:准确称取0、123 2g钠（已于110〜120°C干燥

至恒重，相当于0、1000g亚钠），以重蒸水溶解，移于500ml容量瓶中并定容。 此液浓度为200 P g/ml亚钠。

⑦ 钠标准使用液:临用时吸取标准液2、50ml置于100ml容量瓶中，

加水定容。此液浓度为5 P mg/ml亚钠。

⑧ 亚钠标准使用液同亚盐得测定。

2、3操作步骤

2、3、1样品得处理。同亚盐测定。 2、3、2镉柱还原效率得测定

① 先以25ml稀氨缓冲洛液冲洗镉柱，流速控制在3〜5ml/min（以滴定管

代替得,可控制在2〜3ml/min）。

② 吸取20ml钠标准使用液，加入5ml稀氨缓冲溶液，混匀，注入储液

漏斗，使流经镉柱还原，以原烧杯收集流出液，当储液中溶液流完后，再加5ml水 置换柱内留存溶液。将全部收集液如前经镉柱再还原一次,第二次流出液收集于

100ml容量瓶中，再用20ml水洗涤镉柱,共洗涤3次，洗涤液收集于同一容量瓶中,

加水至刻度,混匀。

③ 吸取10.00ml还原后得标准液（相当于10mg亚钠）于50ml比色管

中，加人2、0ml对氨基苯磺酸溶液（4g/L）,混匀，静置3〜5min,各加入1、0ml盐 酸蔡乙二胺溶液（2g/L）,加水至刻度，混匀，静置15min,用2cm比色杯，于538nm 处

11水覆盖镉柱。

测定吸光度并绘制标准曲线。根据标准曲线计算测得结果。还原效率大于98% 为符

合要求。

式中:

x—还原效率，％ ;

A—测得亚盐得含量，ug;

10—测定用溶液相当于亚盐得含量，ugo

2、3、3样品中亚盐总量测定

① 样液还原:吸取20ml样品处理液于50ml烧杯中，加5ml氨缓冲溶液，

混匀后注入储液漏斗中，使流经镉柱还原，以下按镉柱还原效率测定操作进行，收 集还原后得样液于100ml容量瓶中并定容。

② 吸取10〜20ml还原后得样液于50ml比色管中，以下按镉柱还原效率测

定操作进行，测得吸光度，从标准曲线上查出亚盐量。

2、3、4亚盐测定

吸取40ml样品处理液于50ml比色管中，按亚测定操作进行,测定吸光度, 从标准曲线上查出亚盐含量。

2、4结果计算

式中：

X—盐含量,mg/kg;

A「一经镉柱还原后测得得亚盐量，ng;

比一不经镉柱还原直接测得得亚盐量，Pg;

V—测定用经镉柱还原后样液体积,ml; 1、232—亚钠换算为钠得系数；

m—样品得质量,go

5注意事项

① 实验前要对容量瓶进行检漏及清洁。

② 要注意把握实验过程中得时间还有把握住试剂得用量。

③ 注意加入试管中样品得浓度不要太浓，反应后最后颜色最好处于标准液之间。 ④ 实验后要注意搞好卫生。