安徽医药Ａｎｈｕｉ Ｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ２０１０ Ｍａｙ；１４（５） ・５３５・ 橘红枇杷片中柚皮苷的含量测定 唐德智 （广西南宁食品药品检验所，广西南宁５３０００１） 摘要：目的建立橘红枇杷片中柚皮苷的含量测定方法。方法用超声波提取法制备供试品溶液；采用Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＶＰ－ＯＤＳ Ｃ 。 色谱柱（２５Ｏ ｍｍ ｘ４．６ ｍｍ，５ ｍ），以乙腈一０．２％磷酸（１９：８１）为流动相；流速１．０ ｍｌ・ｒａｉｎ～；检测波长２８３ ｎｍ；柱温：３Ｏ℃。 结果柚皮苷进样量在０．０９７—１．７４２ Ｉｘｇ范围内线性关系良好（ｒ＝０．９９９９，ｎ＝６），平均加样回收率为９８．７％，ＲＳＤ为１．１％（ｎ ＝９）。结论本方法操作简便，结果准确、可靠，可用于橘红枇杷片中柚皮苷的含量测定。 ‘ 关键词：橘红枇杷片；柚皮苷；高效液相色谱法 Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｒｉｎｇｉｎ ｉｎ ｊｕｈｏｎｇ ｐｉｐａ ｔａｂｌｅｔｓ ＴＡＮＧ Ｄｅ．ｚｈｉ （Ｎａｎｎｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ ５３０００１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｉｍ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｎａｆｎｇｉｎ ｉｎ ｊｕｈｏｎｇ ｐｉｐａ ｔａｂｌｅｔｓ ｗｉｔｈ ＨＰＬＣ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｗａｖｅ ｗａｓ ａｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ｔｈｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｌｕｍｎ ｏｆ Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＶＰ—ＯＤＳ Ｃｌ８（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５ Ｉｘｍ）Ｗａｓ ｕｓｅｄ，ｗｉｈｔ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ一 ０．２％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（１９：８１），ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ ｌｆｏｗ ｒａｔｅ Ｗａｓ １．０ ｍｌ・ｍｉｎ一，山ｅ ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２８３ ａｍ ａｎｄ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ３０￣Ｃ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｗａｓ ｆｒｏｍ ０．０９７ ｔｏ １．７４２ Ｉｘｇ（ｒ＝０．９９９９，ｎ＝６）．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖ— ｅｒｙ ｗａｓ ９８．７％，ａｎｄ ＲＳＤ ｗａｓ １．１％（ｎ：９）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ，ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｓｕｉｔｂｌａｅ ｏｒｆ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂａｒ－ ｉｎｇｉｎ ｉｎ ｊｕｈｏｎｇ ｐｉｐａ ｔｂｌａｅｔｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｊｕｈｏｎｇ ｐｉｐａ ｔａｂｌｅｔｓ；ｎａｒｉｎｇｉｎ；ＨＰＬＣ 橘红枇杷片是由化橘红、陈皮、枇杷叶、桔梗、紫苏子、甘草 等六味中药组成的中药制剂，具有止咳祛痰的功效，临床上用 于用于咳嗽痰多等症状。方中化橘红为主药，具有散寒，燥湿， 检测波长：２８３ ｎｍ；流速：１．０ ｍｌ・ｍｉｎ～；柱温：３０ｏＣ；进样量： １０ 。 ２．２对照品溶液的制备精密称取柚皮苷对照品９．６８ ｍｇ， 利气，消痰的功效，其主要有效成分为柚皮苷 Ｊ。该制剂收载 药相关有效成分含量测定方法，亦未见有相关文献报道。本实 验采用高效液相色谱法对橘红枇杷片中柚皮苷的含量测定方 法进行研究，为该制剂的质量控制提供定量测定支持。 １仪器与试药 置５０ ｍ１量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得 于卫生部药品标准中药成方制剂第四册 Ｊ。现标准中尚无该 ０．１９３６ ｇ・Ｌ 对照品储备液。精密量取对照品储备液５ ｍｌ 置１Ｏ ｍ１量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 ２．３供试品溶液的制备取本品１０片，研细，取约１．８ ｇ，精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇１５ ｒｎ１，密塞，称定重 量，超声处理２５ ｍｉｎ（功率２５０ Ｗ，频率３３ ｋＨｚ）放冷，再称定 重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 ２．４阴性供试品溶液的制备按质量标准中的处方，按制备 工艺制成缺橘红和陈皮的阴性供试品，再按供试品溶液的制 备方法制成阴性供试品溶液。处方：化橘红１８ ｇ、陈皮６ ｇ、枇 杷叶２２ ｇ、桔梗２１ ｇ、紫苏６９ ｇ、甘草１４ ｇ。 ２．５ 系统适用性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶 液和阴性供试溶液各１０ ｌ，注入液相色谱仪，按上述色谱条 件测定，记录色谱图，结果见图１。结果阴性供试品的色谱图 色谱柱：岛津Ｓｈｉｍ—ｐａｃｋ ＶＰ—ＯＤＳ Ｃ１８（２５０ 在柚皮苷保留时间的相应位置上无柚皮苷峰出现，此方法专 属性强，阴性对照无干扰。 日本岛津ＬＣ．２０１０Ａ ＨＴ高效液相色谱仪（包括ＬＣ－２０１０Ａ 紫外检测器）。ＬＣ—Ｓｏｌｕｔｉｏｎ色谱数据工作站；日本岛津ｕＶ一 １６０１紫外分光光度计；ＳＢ２５—１２ＤＴＳ型超声波清洗器（功率： ２５０ Ｗ，频率：３３ ｋＨｚ）。乙腈为色谱纯，磷酸为色谱纯，水为超 纯水。柚皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号： １１０７２２—２００６１０，供含量测定用）。橘红枇杷片（广西Ａ制药 有限公司规格：每片重０．２８ ｇ市售药品）。 ２方法与结果 ２．１色谱条件ｍｍ ｘ ４．６ ｍｍ，５ ｍ）；流动相：乙腈一０．２％磷酸（１９：８１）； Ｏ ２０ ４０／ｍｉｎ ０ ２０ ４０／ｍｉｎ Ｏ Ａ．柚皮苷对照品 Ｂ．样品 Ｃ．阴性样品 图１橘红枇杷片的ＨＰＬＣ图（注：１．柚皮苷） ・５３６・ 安徽医药Ａｎｈｕｉ Ｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｃｉａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ２０１０ Ｍａｙ；１４（５） ２．６ 线性关系考察 精密吸取“２．２”项下对照品储备液 ０．５、１、３…５ ７ ９ ｍｌ，分别置１０ Ｔｎｌ量瓶中，加甲醇至刻度，摇 ２．１１样品含量测定取５批橘红枇杷片，依法制备供试品 溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各１０ ｌ，注入 液相色谱仪，按上述色谱条件测定，按外标法计算中橘红枇杷 片柚皮苷的含量，结果见表２。 ３讨论 匀。分取上述不同浓度对照品溶液１０ 注入液相色谱仪， 记录峰面积，峰面积分别为：１６２４６３、３１０７７６、９０２４９９、 １４９４２２２、２０８５９４５、２６７７６６８。以进样量（ ｇ）为横坐标，峰面积 为纵坐标绘制标准曲线。回归方程为：Ｙ＝１．５２９×１０。Ｘ＋ １．４１５×１０ ，ｒ＝０．９９９ ９（ｎ＝６）；结果表明柚皮苷进样量在 ０．０９７一Ｉ．７４２ ｔｘｇ范围内具有良好的线性关系。 化橘红是该制剂的君药，具有散寒，燥湿，利气、消痰的功 效，化橘红中的主要成分为柚皮苷。本实验建立高效液相色 ２．７进样精密度试验精密吸取柚皮苷对照品溶液ｌ０ ｌ， 谱法测定橘红枇杷片中柚皮苷含量的定量分析方法，经考察， 方法简便，结果准确，重现性好，可用于该制剂的质量控制。 注入液相色谱仪，重复进样６次，测定柚皮苷峰面积，结果峰 面积分别为：１５００８９５、１４９０３４８、１４９９８０６、１５００９５８、１５００６７５、 １４９０２８４，ＲＳＤ为０．３６％，表明仪器精密度良好。 ２．８稳定性试验取供试品溶液（批号：０７０４０１），分别在０， ２，４，６，８，１２，１６，２４ ｈ进样测定，峰面积分别为：１４９０３４６、 １４９６２２４ １４９９０６５ １５０７５４４ １５１６４８３ １５２１９２２ １５３３３７５ １５６０９８４，峰面积的ＲＳＤ为１．５３％，表明供试品溶液在２４ ｈ内 稳定。 ２．９精密度一重复性试验 取同一批号供试品（批号： ０７０４０１）６份，每份１．８ ｇ，按“２．３”项下方法制备供试品溶 液，按上述色谱条件测定，测得柚皮苷峰面积分别为： １４８０９１２、１４９３７１０、１４７７４９５、１５０９３７３、１４９７３０２、１４６４００１，平均 含量为０．２２ ｍｇ／片，ＲＳＤ为１．０８％，表明方法精密度良好。 ２．１０回收率试验精密称取已知柚皮苷含量（批号０７０４０１ 柚皮苷含量０．２２ ｍＳ／片）的样品约０．９ ｇ，共９份，每３份为１ 组，按低、中、高３个量级分别加入柚皮对照品适量，按“２．３” 项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收 率。平均回收率为９８．７％，ＲＳＤ为１．１％。结果见表１。 表１加样回收率试验结果（ｎ＝６） 表２橘红枇杷片中柚皮苷的含量测定结果（ｎ＝５） ３．１检测波长的选择取柚皮苷对照品溶液，在紫外分光光 度计上于波长２００～４００ ｎｍ处扫描，结果在２８３ ｎｍ处有最大 吸收，故以２８３ ｎｍ为检测波长。 ３．２流动相的选择参照《中国药典》及相关文献 ，考 察了甲醇－水（３８：６２）、甲醇－０．４％磷酸溶液（４０：６０）、甲醇－ ０．１％冰醋酸溶液（３２：６８）、乙腈 ．５％磷酸（１８：８２）等流 动相，但均存在分离不佳，保留时间过长或过短，峰形差，柚皮 苷与相邻组份未能达到基线分离。采用乙腈一水（１９：８１）且 加入适量磷酸，调整流动相酸度，可以使柚皮苷与相邻峰较好 分离，出峰时间适中。最终确定乙腈－０．２％磷酸（１９：８１）为 流动相。 参考文献： ［１］ 国家药典委员会．中国药典（一部）［ｓ］．北京：化学工业出版 社．２００５：５１． ［２］ 卫生部药典委员会．中华人民共和国卫生部药品标准中药成方 制剂（第４册）ＷＳ３一Ｂ－０８６６—９１［Ｓ］．北京：化学工业出版社， １９９８． ［３］ 张红岩，耿硎，唐岩．ＨＰＬＣ测定活血通脉片中橙皮苷的含 量［Ｊ］．中国药师，２００９，１２（３）：３４５—６． ［４］才谦，刘玉强．ＨＰＬＣ测定舒筋定痛片中柚皮苷的含量［Ｊ］．中 成药，２００８，３０（４）：附３—４． ［５］ 申欣．ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定伸筋丹胶囊中柚皮苷的含量研究［Ｊ］． 中医药导报，２００８，１４（８）：１０７—８． ［６］ 彭文莉，周文艳．高效液相色谱法测定养胃舒颗粒中橙皮苷的 含量［Ｊ］．安徽医药，２００８，１２（４）：３１１—２． ［７］ 吕贻胜．ＨＰＬＣ法测定陈皮中橙皮苷含量［Ｊ］．安徽医药，２００７， １１（９）：７９６—７． ［８］赵向阳．止泻灵颗粒质量标准研究［Ｊ］．安徽医药，２００７，１１（７）： ６１４—５． ［９］何争民，王举涛．ＨＰＬＣ法测定小儿消食咀嚼片中橙皮苷的含量 ［Ｊ］．安徽医药，２００７，１１（４）：３２７—８． ［１Ｏ］徐成志．ＨＰＬＣ法测定木香顺气丸中橙皮苷的含量［Ｊ］．安徽医 芩 ，２００７，１１（１）：３６—７． ［１１］徐成志．ＨＰＬＣ法测定通林片中柚皮苷的含量［Ｊ］．安徽医药， ２００６，１０（８）：５８５—６． （收稿日期：２００９—１１—０３）
