第８期（总第２８９期） ２０１２年８月 农产品加工・学刊 Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｅｒｉｏｄｉｃａｌ ｏｆ Ｆａｒｍ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｎｏ．８ Ａｕｇ． 文章编号：１６７１—９６４６（２０１２）０８—０００９—０３ 聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的制备与鉴定 王浩贤， 许加超，付晓婷，高 昕 （中国海洋大学食品科学与工程学院，山东青岛２６６００３） 摘要：褐藻胶经过稀ＨＣ１降解，ｐＨ值２．８５分级获得２种聚糖粗品。通过ｄｏｗｅｘ阴离子交换分离，浓度０．５～２．０ ｍｏＩ／Ｌ 的醋酸梯度洗脱提纯，即获得高纯度的聚甘露糖醛酸（ＰＭ）和聚古罗糖醛酸（ＰＧ）。采用高效液相色谱技术对其分 子量及纯度进行初步测定，利用核磁共振技术对其分子结构和纯度进行最终鉴定。由核磁共振图谱可得其结构保持 了Ｍ，Ｇ的原有结构，且制得的２种聚糖纯度均在９５％以上。 关键词：聚甘露糖醛酸；聚古罗糖醛酸；离子交换；制备；鉴定 中图分类号：ＴＱ２８ 文献标志码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊｉｓｓｎ．１６７１—９６４６（Ｘ）．２０１２．０８．００２ Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｏｌｙｍａｎｎｕｒｏｎｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｐｏｌｙｇｕｌｕｒｏｎｉｃ Ａｃｉｄｓ ＷＡＮＧ Ｈａｏ－ｘｉａｎ，’ＸＵ Ｊｉａ－ｃｈａｏ，ＦＵ Ｘｉａｏ—ｒｉｎｇ，ＧＡＯ Ｘｉｎ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｏｃｅａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎａ，Ｑｉｎｇｄａｏ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２６６００３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｌｇｉｎ ｃａｎ ｂｅ ｃｌａｓｓｉｉｆｅｄ ｉｎｔｏ ｔｗｏ ｃｒｕｄｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｇｌｙｃａｎ ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅｌｙ ａｆｔｅｒ ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｂｙ ｄｉｌｕｔｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｒａｄｉｇｎｇ ｉｎ ｐＨ ２．８５．Ｔｈｅ ｐｏｌｙｍａｎｎｕｒｏｎｉｅ ａｃｉｄ（ＰＭ）ａｎｄ ｐｏｌｙｇｕｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＰＧ）ｉｎ ｈｉｇｈ ｐｕｒｉｔｙ ｃａｎ ｂｅ ｐｕｒｉｉｆｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｔｗｏ ｃｒｕｄｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｇｌｙｃａｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｏｗｅｘ ａｎｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ０．５－２．０ ｍｏｌ／Ｉ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ．ＰＭ ａｎｄ ＰＧ’Ｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔｓ ａｎｄ ｐｕｒｉｔｉｅｓ ａｒｅ ｐｒｉｍａｒｉｌｙ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅ ｆｉｎａｌ ｉｄｅｎｔｉｉｃａｔｆｉｏｎ ｏｆ ＰＭ ａｎｄ ＰＧ’Ｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｐｕｒｉｔｉｅｓ ｕｓｅ ｔｈｅ ＮＭＲ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｔｈｉｓ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｃａｎ ｋｅｅｐ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎａｌ ｓｔｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｒＭ ａｎｄ Ｇ，ｗｈｏｓｅ ｐｕｒｉｔｉｅｓ ａｒｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ９５％． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｏｌｙｍａｎｎｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄｓ；ｐｏｌｙｇｕｌｕｒｏｎｉｅ ａｃｉｄｓ；ａｎｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ；ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ；ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ 褐藻胶（ａｌｇｉｎ）是一种来源于褐藻细胞壁的生 用酸法降解制备褐藻胶多聚糖（Ｄｐ＝４５～６０）并对其 物直链多糖，由Ｂ—Ｄ一甘露糖醛酸（Ｍ）和 一Ｌ一 结构进行了表征。 古罗糖醛酸（Ｃ）通过１—４糖苷键连接而成，整个 １材料与方法 分子含有聚甘露糖醛酸片段（ＰＭ）、聚古罗糖醛酸片 段（ＰＧ）和聚甘露糖醛酸一古罗糖醛酸杂合段口＿２ｌ。 １．１材料与仪器 巨藻褐藻胶，青岛明月海藻集团有限公司提供； 研究表明 ，褐藻胶降解后，得到的低聚糖的生物 ｇａｍａ—ａｌｄｒｉｃｈ公司提供； 活性显著的提高了，并可产生新的生物活性。褐藻 ｄｏｗｅｘ强阴离子树脂，Ｓｉ胶具有抗肿瘤［５１、增强免疫１６１等活性，在化工、食品、 ＬＧＪ一１２型冷冻干燥机，北京松源兴科技发展有限公 医药等领域应用广泛。但是由于藻种、藻生长环境、 司提供；Ｗａｔｅｒｓ ５２ＳＡＸ型阴离子交换柱；ＴＳＫ—ｇｅｌ 藻部位等因素的影响，褐藻胶的分子大小，ＭＧ的组 Ｇ３０００ ＰＷｘｌ型色谱柱；葡聚糖系列标准品Ｄｅｘｔｒａｎ 成比等有很大的差别，这给具体研究Ｍ，Ｇ不同的 （分子量分别为４．３２，１２．６，６０．６，１ １０，２８９，５２１ ｋＤ）， 功能带来很大不便ｌ１．－－。因此，最近的研究主要集中 中国计量科学研究院提供；１ １００型高效液相色谱仪， 在降解褐藻胶以获得高纯度的Ｍ，Ｇ组分上。褐藻胶 安捷司提供；ＪＮＭ——ＥＣＰ６００型核磁共振波普 用酶法降解，在聚糖非还原端形成不饱和双键 ；用氧 仪，日本理光公司提供。 化法降解，可使聚糖的还原端开环形成羧基 ；用酸 １．２聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的粗提取【 法降解则能保持大分子固有的结构特征。本研究采 褐藻胶加水溶胀至２％（质量体积分数），调体 收稿日期：２０１２—０３—２６ 基金项目：江苏省重大成果转化（ＢＡ２００９０８８）。 作者简介：王浩贤（１９８６一），男，河北人，硕士，研究方向：水产品加工及贮藏。Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｌｌｇｈａｏｘｉａｎ＠ｇｍａｉｌ．ｅｏｍ。 为通讯作者：许加超（１９６３一），男，副教授，研究方向：海藻化学。Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｕｊｉａ＠ｏｕｃ．ｅｄｕ．ｃａ。 ｌ０ 农产品加工・学刊 ２０１２年第８期 系ＨＣ１浓度为０．５ ｍ０ｌ／Ｌ，１００℃水解１０ ｈ；离心 换色谱柱后采用苯酚一硫酸法对收集管中的洗脱液 （转速４ ０００ ｒ／ｍｉｎ，时间１０ ｍｉｎ），沉淀用质量分数 的糖含量进行测定。８％的ＮａＨＣＯ 溶解，用浓度０．３ ｍｏｌ／Ｌ的稀ＨＣ１调 聚甘露糖醛酸洗脱液各管吸光度见图１。 ｐＨ值至２．８５；经抽滤，得黄色清液和沉淀； 清液部分加入３倍体积的体积分数９５％的乙 醇，离心（转速４ ０００ ｒ／ｍｉｎ，时间１０ ｍｉｎ），取沉 淀，以过量无水乙醇脱水，抽滤除去残余乙醇及水， 干燥得块状样品。样品溶于ＮａＨＣＯ 溶液中，调ｐＨ 值２．８５，得到的上清液重复上述操作２次，便可得 ０ ９ Ｏ ８ ０ ７ ０ ６ 倒０ ５ 。一４ Ｏ ３ 到较高纯度的甘露糖醛酸粗品ＰＭ。 沉淀部分经抽滤除去酸液，加水稀释至６％，用 质量分数１０％的ＮａＯＨ溶液调ｐＨ值至７．０～８．０，使 沉淀物溶解，过滤后除去部分杂质及色素。滤液用 浓度０．３ ｍｏＦＬ的ＨＣ１的溶液调ｐＨ值至２．８５，得沉 淀，抽滤再次回收沉淀；再用质量分数１０％的ＮａＯＨ 溶液溶解沉淀，同上述方法重复２次，便可获得较 高纯度的古洛糖醛酸粗品ＰＧ。 １－３聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的精制 称取０．４ ｇ经沉淀分离得到的ＰＭ和ＰＧ粗品固 体粉末，加少量水使之溶解，滴加浓度０．１ ｍｏｌ／Ｌ的 ＮａＯＨ溶液调ｐＨ值至８．０左右，静置０．５ ｈ，加人活性 炭粉末除去色素，取上清液，超声波脱气１０ ｍｉｎ，样 品进柱。水解液进柱完成交换后，以浓度０．５～２．０ ｍｏｌ／Ｌ 的醋酸进行线性梯度洗脱（流速１ ｍＬ／ｍｉｎ），洗脱液用 部份收集器收集。洗脱液用硫酸一苯酚法显色，于 波长４８５ ｎｍ处测定各管吸光度，以管数对吸光度作 图，收集ＰＭ和ＰＧ集中的组分。脱盐，冷冻干燥。 １．４分子量测定 将样品及已知分子质量的葡聚糖系列标准品通 过ＴＳＫ—ｇｅｌ Ｇ３０００ ＰＷｘｌ型色谱柱，流动相为 浓度０．２ ｍｏ／Ｌ的ＮａＣ１溶液（０．４５ ｍ玻璃砂芯过滤 装置过滤并脱气），柱温４０℃，流速０．５ ｍＬ／ｍｉｎ， 示差检测器（ＲＩＤ）检测，进样体积２Ｏ Ｌ【”】。 １．５纯度分析及结构表征 Ｗａｔｅｒｓ ５２ＳＡＸ型阴离子交换柱（４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍ； 流动相：含５％甲醇的０．０２ ｍｏｌ／Ｌ ＫＨ ＰＯ 溶液，流速 为０．６ ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２１０ ｎｍ；检测温度为室 温，进样体积为２０ Ｌ）进行纯度测定；将１５ ｍｇ样 品溶于０．５ ｍＬ Ｄ：０中，冻干，重氢交换３次，于８０ ｃｃ 下测定 Ｈ ＮＭＲ谱 ４】。 ２结果与讨论 ２．１聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的酸解粗提及精制 褐藻酸盐经过ＨＣＩ水解，再通过ｐＨ值和乙醇沉 淀初分离，得到聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸粗品， 经ｄｏｗｅｘ强阴离子交换色谱柱交换进一步提纯，即 可获得高纯度的聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸精品。 其中，聚甘露糖醛酸在通过ｄｏｗｅｘ强阴离子交 Ｏ ２ ０】 Ｏ ．０ １ 管数／管 图１ 聚甘露糖醛酸洗脱液各管吸光度 由图１可知，Ｏ～２０管中糖含量很低，从第２１管 开始，洗脱液的吸光度急剧上升，第４０管后，糖含 量已接近于０，离子交换柱上结合的糖已被充分洗 脱。收集合并吸光度在最大吸收值一半以上的管中 的聚甘露糖醛酸，进行分子量及纯度测定。 聚古罗糖醛酸在通过ｄｏｗｅｘ强阴离子交换色谱 柱后采用硫酸苯酚法对收集管中的洗脱液的糖含量 进行测定。 聚古罗糖醛酸洗脱液各管中糖含量吸光度见图２。 ｌ ２ １ Ｏ Ｏ ８ 。一６ 督 Ｏ ４ Ｏ ２ Ｏ Ｊ １Ｉ ２ｌ ｊｌ ４ｌ ，Ｉ ６ｌ ７ｌ 管数／管 图２聚古罗糖醛酸洗脱液各管中糖含量吸光度 由图２可知，０～１１管中糖含量很低，从第１ １管 开始洗脱液的吸光度急剧上升，第３１管后糖含量已 接近于０，离子交换柱上结合的糖已被充分洗脱。收 集合并吸光度在最大吸收值一半以上的管中的聚古 罗糖醛酸，进行分子量及纯度测定。 ２．２分子量的测定 利用标准分子量的葡聚糖得出糖分子量对数 （１ｏｇ Ｍｗ）对保留时间（ ）进行回归处理，得到线性 回归方程： ｌｏｇ Ｍｗ＝－０．４０７ １ ｔ＋１ ０．２５４．Ｒ。＝０．９８９ ８． 标准分子量葡聚糖分子量标准曲线见图３。 分析显示，ＰＭ和ＰＧ均为对称单峰，ＰＭ和ＰＧ保 留时间分别１５．１７４ ｍｉｎ，ＰＣ的保留时间为１５．２８６ ｍｉｎ， 带入方程得ＰＭ，ＰＧ分子量分别为Ｍｗ（ＰＭ）＝ １ １ ９３０．６６ Ｄａ（聚合度约６０）和Ｍｗ（ＰＧ）＝１０ ７４１．６１ Ｄａ ２０１２年第８期 王浩贤，等：聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的制备与鉴定 时州ｔ／ａｒｉｎ 图３标准分子量葡聚糖分子量标准曲线 （聚合度约５４）。 ２．３多聚糖结构及纯度分析 ２．３．１多聚糖ＨＰＬＣ纯度测定 经精制后的聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸经 ＨＰＬＣ进行纯度分析。 聚甘露糖醛酸（ａ）和聚古罗糖醛酸（ｂ）的 ＨＰＬＣ阴离子交换色谱见图４。 图４ 聚甘露糖醛酸（ａ）和聚古罗糖醛酸（ｂ）的 ＨＰＬＣ阴离子交换色谱 经离子交换色谱精制后的ＰＭ和ＰＧ片段经 ＨＰＬＣ阴离子交换色谱初步检测各自纯度，由ＨＰＬＣ 色谱图可知，聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的ＨＰＬＣ 色谱图均呈现单峰且峰形对称，其中聚甘露糖醛酸 和聚古罗糖醛酸的保留时间分别为１６．５１９ ｍｉｎ和 １８．３２８ ｍｉｎ。由此可推断，聚甘露糖醛酸和聚古罗糖 醛酸经过ｄｏｗｅｘ阴离子交换色谱后得以很好地纯化。 ２．３．２纯度分析及结构表征 ＰＭ Ｈ—ＮＭＲ图谱见图５，ＰＧ Ｈ—ＮＭＲ图谱见图６。 ５５ ５Ｄ ４９ ４８ ４７ ４６ ４５ ４４ ４３ ４２ ４１ ４０ ３９ ３．８ ３．７ ３６ ３．５ ３４ ３．３ ３２ ３１ ３Ｄ ２９ ２．８ 图５ ＰＭ Ｈ—ＮＭＲ图谱 Ｈ．５ ５２ ５１ ５．０ ４９ ４８ ４７７ ４６ ４ ５ ４４ ４３ ４２ ４１ ４０ ３９ ３．９ ３７７ ３．６ ３５ ３．４ 图６ ＰＧ Ｈ—ＮＭＲ图谱 由图５和图６可知，试验获得的ＰＭ和ＰＧ的纯 度可达到９５％以上。其中，在ＰＭ的。Ｈ ＮＭＲ图谱 中，４．６２为碳Ｈ一１信号，４．Ｏ２为Ｈ一２信号峰，３．８７ 为Ｈ一４信号峰，３．７４为Ｈ一３信号峰及３．７３为Ｈ一５ 信号峰，但在５．０处有微弱的Ｇ Ｈ一１信号峰的出现； 在ＰＧ的 Ｈ ＮＭＲ图谱中，５．０２为异头碳还原端Ｈ一１ 信号，４．４３为Ｈ一５信号峰，４．０９为Ｈ一４信号峰， ３．９７为Ｈ一３信号峰，３．８９为Ｈ一２信号峰。以上ＰＭ， ＰＧ信号峰均与文献报道吻合＿１５］。 综上可得，经酸解及阴离子交换树脂制得的样 品确证为ＰＭ和ＰＧ，其分子保持了原褐藻胶大分子 的结构特征，且纯度均可达到９５％以上。 参考文献： ［１］ 纪明侯．海藻化学［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９７． ［２】 Ｈｅｙｒａｕｄ Ａ，Ｃｏｌｉｎ Ｍｏｒｅｌ Ｐ，Ｇｉｒｏｎｄ Ｓ，ｅｔ ａｌＪ ＨＰＬＣ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓａｔｕｒａｔｅｄ ｏｒ ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｏｌｉｇｏｇｕｌｕｒｏｎａｔｅｓ ａｎｄ ｏｌｉｇｏｍａｎｎｕｒｏｎａｔｅｓ／Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｃｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ Ｈａｌｉｏｔｉｓ ｔｕｂｅｒｃｕｌａｔａ ａｌｇｉｎａｔｅｌｙａｓｅ【Ｊ］． Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓ，１９９６，２９１：１ １５－１２６． ［３３］ １ｗａｍｏｔｏ Ｙ，Ｘｕ Ｘ，Ｔａｍｕｒａ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙ ｄｅ— ｐｏｌｙｍｅｒｉｚｅｄ ａｌｇｉｎａｔｅ ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ ｔｈａｔ ｃａｕｓｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ【ＪＪ．Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２００３，６７（２）：２５８—２６３． 【４】 Ｋａｗａｄａ Ａ，Ｈｉｕｒａ Ｎ，Ｓｈｉｒａｉｗａ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕ— ｍａｎ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｂｙ ａｌｇｉｎａｔｅ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｆｉｄｅｓ，ａ ｐｏｓ－ ｓｉｂｌｅ ｃｏ－ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ【Ｊ】． （下转第１６页） 农产品加工・学刊 ２０ｌ２年第８期 度下，反应体系肉眼看呈一相黄色透明溶液，加入 碱催化剂时也不容易皂化。保持总醇油摩尔比不变 （１）比较１０种溶剂的毒性，苯没有特别的溶解 的情况下，甲醇和乙醇的最佳摩尔比是３：ｌ。 性能优势而且有剧毒；石油醚、正己烷、１，４一二氧 参考文献： 六环毒性也不低，石油醚和正己烷还不可与甲醇互 【１】 Ｍｅｈｅｒ Ｌ Ｃ，Ｓａｇａｒ Ｄ Ｖ，Ｎａｉｌ Ｓ Ｎ．Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ 溶；正己烷、四氢呋喃价格很高；乙醚、１，２一环氧 ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｃａｔｆｉｏｎ ａ ｒｅｖｉｅｗ ． Ｒｅｎｅｗａｂｌｅ ａｎｄ Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ Ｅｎｅｒｇｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００６，１ ０： 丙烷沸点低容易挥发，造成资源浪费和环境污染。 ２４８－２６８． 从介电常数上来看，乙醚、苯、正己烷、四氢呋喃、 ２］ Ｇｕｏｑｉｎｇ Ｇｕａｎ， Ｎｏｚｏｍｉ Ｓａｋｕｒａｉ， Ｋａｔｓｕｋｉ Ｋｕｓａｋａｂｅ． １，２一环氧丙烷、１，４一二氧六环对甘油三酸酯的溶 【Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｆｒｏｍ ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ ｏｉｌ ａｔ ｒｏｏｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ 解性都比较好。实测的常温三元溶解性能结果显示， ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｖａｒｉｏｕｓ ｃｏｓｏｌｖｅｎｔｓ『Ｊ１．Ｃｈｅｍｉｃａｌ 乙醚、苯、四氢呋喃、１，２一环氧丙烷三元溶解性能 Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｏｕｒｎａｌ，２００９，１４６（２）：３０２—３０６． 较好，达到酯交换反应温度（６０ ｏＣ）时，乙醇的三 ［３】 Ｊｏｎ Ｖａｎ Ｇｅｒｐｅｎ．Ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｅｌ ｑｕａｌｉｔｙ［Ｊ／ＯＬ］． 元溶解性能颇好，而价格较溶剂中最低，有一定的 ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｉｗｅｂ．ｕｉｄａｈｏ．ｅｄｕ／ｂｉｏｅｎｅｒｇｙ／ＢｉｏｄｉｅｓｅｌＥｄ／ｐｕｂｌｉｃａ—— ｔｉｏｎ／０１．ｐｄｆ． 比较竞争能力。 ４】 李奕怀，吴富军，顾超，等．有机共溶剂中向日葵油制 （２）比较乙醇、乙醚、四氢呋喃、１，２一环氧丙 Ｉ备生物柴油的研究ＩＪ１．江苏农业科学，２０１０（４）： 烷４种溶剂和空白条件下对酯交换反应的影响。在 ２６９—２７１． 溶剂同等添加量的条件下，乙醇共溶剂的转酯化产 ［５】 刘冰，王承明，高培钧．甲基叔丁基醚作助溶剂合成生 率最高，达到３５．７％，酯化率比空白高２１．０％。本试 物柴油研究［Ｊ］．现代商贸工业，２０１０（２）：２９７—２９９． 验中乙醇以较低添加量可以得到较高的转酯化率。 【６］ 廖李，黄凤洪，李文林，等．甲醇亿醇均相体系酯交换 这与岳鸥和Ｂｏｏｃｏｃｋ等人使用的惰性共溶剂来增加相 制备生物柴油的研究【Ｊ］．可冉生能源，２００８，２６（６）： 界面的有效面积相比，乙醇在达到相同效果条件下， ２５－２９． 价格便宜外，添加量少。 ［７】 廖李，程薇，王少华，等．超声波强化甲醇一乙醇混合 体系酯交换制备生物柴油［Ｊ］．农产品加１一，２００９（１０）： （３）溶剂乙醇有效性试验结果。当酰基受体为 】３一】６． 甲醇和乙醇的混合酯交换反应，比酰基受体是单一 ａ１．Ｆａｓｔ ｏｎｅ— ８】 Ｂｏｏｃｏｃｋ Ｄ Ｇ Ｂ，Ｋｏｎａｒ Ｓ Ｋ，Ｍａｏ Ｖ，ｅｔ的甲醇或乙醇的酯交换反应，反应速率上有明显的 【ｐｈａｓｅ ｏｉｌ—ｒｉｃｈ ｐｒｏｅｅｓｓｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｏｉｌ 提高，反应２０ ｍｉｎ，甲醇与乙醇摩尔比３：１混合的 ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒｓ【Ｊ］．Ｂｉｏｍａｓｓ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｅｒｙ，１９９６，１ｇ １（１）： 转化率比甲醇高７．０％，比乙醇高１６．１％；而反应２ ｈ ４３－５０． 后，最终的酯交换转化率并无变化，说明溶剂只能 【９］ 岳鸥．油／甲醇／醚三元均相体系合成生物柴油的研究［Ｄ】． 有效提高反应的速率，并且添加乙醇后，在反应温 无锡：江南大学，２００６． ３结论与讨论 ・＋・・＋・・＋・・＋”＋・・＋・・＋・・＋・・＋・・＋・・＋・・＋－・＋・・＋“＋・・＋・・＋”—＋一”—＋一・・—＋－一・・—＿卜一・・— 一“——卜“——卜一——卜“—＿．一”—＿＋一”——卜”—．＋一”— 一一—．＋一・ （上接第１ １页） ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．．１９９７。４０８（１）：４３－４６． ｏｆ ｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ａｌｇｉｎｉｃ ａｃｉｄ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｃｈｅｍ Ｓｃａｎｄ， １９６７，２１：６９１． ［５】 Ｆｕｊｉｈａｒａ Ｍ，Ｎａｇｕｍｏ Ｔ．Ａｎ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａｌ— ｇｉｎａｔｅ ｏｎ ｔｈｅ ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ】．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，１９９３，２４３：２ １ １— ２１６． 张洪荣，王长云．一种饱和褐藻胶寡糖的制备方法ｆＪ１ ＿中国海洋药物杂志，２００６，２５（３）：１—６． Ｊ】． 【１２】 纪明侯，曹文达，韩丽君．褐藻酸中糖醛酸组分的测定ｌ海洋与湖沼，１９８１，１２（３）：２４０—２４８． ［１３］ 赵珊，许加超，付晓婷，等．褐藻酸钠降解产物的制备 及其分子量检测方法的研究ｌＪ１．中国海洋药物杂志， ２０１０，２９（６）：３４—４１． ｅｎ Ｈ．Ｈｉｇｈ－ｆｉｅｌｄ， Ｈ－ＮＭＲ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ｏｆ ａｌｇｉｎａｔｅ： ［１４］ Ｇｒａｓｄａｌ【６】 Ｏｔｔｅｒｌｅｉ Ｍ，Ｏｓｔｇａａｒｄ Ｋ，Ｓｋｊ？ｋ—Ｂｒａｅｋ Ｇ Ｇ，ｅｔ ａ１． Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｌｇｉｎａｔｅ【Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，１９９１，１０（４）： ２８６－２９１． 【７】 杨钊，Ｌｉ Ｊ Ｐ，张真庆，等．一种新的褐藻胶寡糖制备 方法一氧化降解法【Ｊ１．海洋科学，２００４，２８（７）：１９． ［８］ 晓路，刘岩，胡晓珂，等．Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐ．５１０产褐藻胶裂合 酶的底物专一性分析［Ｊ］．中国海洋大学学报，２００４， ３４（１）：５５． ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｓｔｕｃｒｔｕｒｅ ａｎｄ ｌｉｎｋａｇｅ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓ，１９８３，１１８：２４４—２６０． 【１５】 Ｈｅｙｒａｕｄ Ａ，Ｇｅｙ Ｃ，Ｌｅｏｎａｒｄ Ｃ，ｅｔ ａ１．ＮＭＲ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｏｌｉｇｏｇｕｌｕｒｏｎａｔｅｓ ａｎｄ ｏｌｉｇｏｍａｎｎｕｒｏｎａｔｅｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ａｃｉｄ ｏｒ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ｈｏｍｏｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｂｌｏｃｋｓ ｏｆ ａｌｇｉｎｉｃ ａｃｉｄ——Ａｐｐｌｉｃａｔｉ０ｎ ｔｏ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ［９］ 杨钊，范莹．不同降解方法制备褐藻胶甘露糖醛酸寡糖 的结构特点【Ｊ】．中国生化药物杂志，２００７，２８（１）： ６９－７１． ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ ｏｆ Ｈａｌｉｏｔｉｓ ｔｕｂｅｒｃｕｌａｔａ ａｌｇｉｎａｔｅｌｙａｓｅ ＩＪＪ． Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９６，２８９：１ １—２３． ［１０】Ｈａｕｇ Ａ，Ｌａｒｓｅｎ Ｂ，Ｓｍｉｄｓｒ＜＜ｄ Ｏ．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
