生物化学实验常用缓冲液的配制方法

上一篇 / 下一篇 2009-03-19 13:49:27 / 个人分类：试剂类

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1、0.2mol/L 磷酸缓冲液 *组份浓度 0.2mol/L （pH 6.0） *配制量 1L

*配置方法 1.称取磷酸氢二钠 .12水 8.82 g。 2.称取磷酸二氢钠 .2水 27.34g。 3.用去离子水溶解并定容至 1L。室温保存。

注意：此为母液，使用时稀释 40倍使用。

2、洗脱液 *组份浓度 0.15mol/L （含 0.15mol/L 氯化钠的 0.005mol/L pH 6.0

的磷酸缓冲液） *配制量 10L

*配置方法 1.称取氯化钠 87.66g。

2.用 0.2mol/L pH6.0的 磷酸缓冲液 250mL溶解。

3.用去离子水稀释至 10L。室温保存。

3、0.3mol/L 磷酸缓冲液 *组份浓度 0.3mol/L （pH7.8） *配制量 0.5L

*配置方法 1.准确称取磷酸氢二钠 .12水 49.150g。

2.磷酸二氢钠.2水 2.000g。

3.用去离子水溶解并定容至 0.5L。室温保存。

注意：此为母液，使用时稀释 10 倍使用。 4、0.2mol/L 乙酸缓冲液 *组份浓度 0.2mol/L （pH4.6）

*配制量 2L

*配置方法 1.准确称取乙酸钠 .3水 54.44g。

2.加入 23mL冰乙酸，溶解。 3.用去离子水溶解并定容至 2L。4℃保存。

5、0.2mol/L 磷酸-柠檬酸缓冲液（pH 2.6、4.6、6.6）*组份浓度 0.2mol/L

*配制量 各 1L

*配置方法 1.母液 A（0.2mol/L 的 Na2HPO4溶液）：称取 Na2HPO4.12 水

143.256g，用去离子水定容至 2L。

2.母液 B（0.1mol/L 的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸 .1水 42.028g用去离

子水溶解定容至 2L。

3. pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制：

pH值 A（mL） B（mL）

2.6 109.0 1.0 4.6 467.5 532.5 6.6 727.5 272.5

4.按上表混匀后， 4℃保存。 6、20×SSC 缓冲液 *配制量 1L（pH7.0） *配置方法 1.准确称取 175.2g氯化钠。 2.准确称取 88.2g柠檬酸钠 .2水。 3.溶解于 800mL去离子水中。

4.加入数滴 10mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH值至 7.0。

5.加去离子水定容至 1L。 注意：按实验需要可分装后高压灭菌。

10×SSC、5×SSC、1×SSC 可由 20×SSC做相应稀释得到。

7、0.15mol/L 氯化钠-乙二胺四乙酸二钠缓冲液（pH8.0） *组份浓度 0.15mol/L

*配制量 1L

*配置方法 1.准确称取氯化钠 8.77g。 2.称取乙二胺四乙酸二钠 37.2g。 3.溶于 800mL去离子水中。 4.用固体的氢氧化钠调 pH 值为 8.0。

5.加去离子水定容至 1L。

8、1/15mol/L 的磷酸盐缓冲液（pH7.6） *组份浓度 0.15mol/L

*配制量 1L

*配置方法 1.溶液甲（1/15mol/L 的 KH2PO4溶液）：称取 KH2PO49.078g，用

去离子水溶解定容至 1L。

2.溶液乙 (1/15mol/L 的 Na2HPO4溶液):称取 Na2HPO4. 2水 11.876g（或

磷酸氢二钠 .12水 23.4g）用去离子水溶解定容至 1L。 3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将 ①和②按 1.4：8.6比例混合即可。

9、5×TrisGlycineBuffer （SDSPAGE电泳缓冲液） *组份浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（w/v）SDS

*配制量 1L

*配置方法 1.称取下列试剂，置于 1L烧杯中。

Tris 15.1g

Glycine 94g SDS 5.0g

2.加入约 800mL的去离子水，搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至 1L后，室温保存。

10、5×SDSPAGE Loading Buffer *组份浓度 250mM TrisHCl（pH6.8）

10％（W/V） SDS 0.5％（W/V） BPB 50％（V/V） 甘油 5％（W/V） β巯基乙醇

*配制量 5mL

*配置方法 1.量取下列试剂，置于 10mL塑料离心管中。

1M TrisHCl1.25mL

SDS 0.5g BPB 25mg 甘油 2.5mL

2.加入去离子水溶解后定容至 5mL。 3.小份（ 500μl/份）分装后，于室温保存。 4.使用前将 25μl的 2-ME加到每小份中。

5.加入 2M-E的 LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右

1、1M TrisHCl * 组份浓度 1M TrisHCl （pH7.4，7.6，8.0） * 配制量 1L

* 配置方法 1.称量 121.1gTris置于 1L烧杯中。

2.加入约 800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的 pH 值。

pH值 浓 HCl

7.4 约 70mL

7.6 约 60mL

8.0 约 42mL

4.将溶解定容至 1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH值，因为 Tris溶液的 pH值随温度

的变化差很大，温度每升高 1℃，溶液的 pH值大约降低 0.03个单位。

2、1.5M TrisHCl *组份浓度 1.5M TrisHCl （pH8.8） *配制量 1L

*配置方法 1.称取 181.7gTris置于 1L烧杯中。

2.加入约 800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调 pH 值至 8.8。

4.将溶液定容至 1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH值，因为 Tris溶液的 pH值随

温度的变化差异很大， 温度每升高 1℃，溶液的 pH值大约降低 0.03个单位。

3、10×TE Buffer *组份浓度 100 mM TrisHCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）

*配制量 1L

*配置方法 1.量取下列溶液，置于 1L烧杯中。

1M TrisHClBuffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL

500 mM EDTA（pH8.0） 20mL

2.向烧杯中加入约 800mL的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定至 1L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

4、3 M 醋酸钠 *组份浓度 3M 醋酸钠 （pH5.2） *配制量 100mL

*配置方法 1.称取 40.8gNaOAc.3H2O置于 100～200mL烧杯中，加入约 40mL的去离子水 搅拌溶解。

2.加入冰乙酸调节 pH值至 5.2。

3.加入去离子水将溶液定容至 100mL。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBSBuffer

*组份浓度 137mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4

*配制量 1L

*配置方法 1.称量下列试剂，置于 1L烧杯中。

NaCl 8 g

KCl 0.2g

Na2HPO4 1.42 g

KH2PO4 0.27g

2.向烧杯中加入约 800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加 HCl将 pH 值调节至 7.4，然后加入去离子水将溶液定容至 1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述 PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充 1mM CaCl2 和 0.5mM MgCl2。

6、10 M 醋酸铵 *组份浓度 10M 醋酸铵 *配制量 100mL

*配置方法 1.称量 77.1g 醋酸铵置于 100～200 mL烧杯中，加入约 30mL

的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至 100mL。

3.使用 0.22μm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7、TrisHCl平衡苯酚 *配置方法

1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免

使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在 160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致 RNA和 DNA的交联等。因此，

苯酚的质量对 DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水

清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：因为在酸性 pH条件下 DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其 pH值达到 7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

① 液化苯酚应贮存于 20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在 68℃水浴中使苯酚充分溶解。

② 加入羟基喹啉（ 8Quinolinol）至终浓度 0.1％。该化合物是一种还原剂、 RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便

识别有机相。

③ 加入等体积的 1M TrisHCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌 15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

④ 重复操作步骤 ③。

⑤ 加入等体积的 0.1M TrisHCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌 15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

⑥ 重复操作步骤 ⑤，稍微残留部分上层水相。

⑦ 使用 pH试纸确认有机相的 pH值大于 7.8。

⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中 4℃避光保存。

8、苯酚 /氯仿/异戊醇 *配置方法

1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯 /酚/氯仿/异戊醇（ 25：24：1）。氯仿可使蛋白（ 25 ：24 ：1） 质变性并有助于液相与有机相的分离，

而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配置方法：将 TrisHCl平衡苯酚与等体积的氯仿 /异戊醇（ 24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中 4℃保存。

9、10％（ W/V）SDS *组份浓度 10％（W/V）SDS *配制量 100mL

*配置方法 1.称量 10g高纯度的 SDS 置于 100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水， 68℃加热溶解。

2.滴加数滴浓盐酸调节 pH值至 7.2。

3.将溶液定容至 100mL后，室温保存。

10、2 N NaOH *组份浓度 2N NaOH *配制量 100mL

*配置方法 1.量取 80mL去离子水置于 100～200mL塑料烧杯中（ NaOH溶解过程

中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2.称取 8g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待 NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至 100mL。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

11、2.5N HCl *组份浓度 2.5 N HCl *配制量 100mL

*配置方法 1.在 78.4mL的去离子水中加入 21.6mL的浓盐酸（ 11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

12、5 M NaCl *组份浓度 5M NaCl *配制量 1L

*配置方法 1.称取 292.2gNaCl置于 1L烧杯中， 加入约 800mL的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至 1L后，适量分成小份。

3.高温高压灭菌后， 4℃保存。

13、20％（ W/V）Glucose *组份浓度 20％（W/V）Glucose *配制量 100mL

*配置方法 1.称取 20gGlucose 置于 100～200mL烧杯中，加入约 80mL的

去离子水后，搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至 100mL。

3.高温高压灭菌后， 4℃保存。

14、Solution I *组份浓度 25mM TrisHCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose （质粒提取用） *配制量 1L

*配置方法 1.量取下列溶液，置于 1L烧杯中。

1M TrisHCl（pH8.0） 25mL

0.5M EDTA（pH8.0） 20mL

20％Glucose（1.11M） 45mL

dH2O 910mL

2.高温高压灭菌后， 4℃保存。

3.使用前每 50mL的 Soliution I中加入 2mL的 RNase A （20mg/mL）。

15、Solution II *组份浓度 250mM NaOH，1％（W/V）SDS （质粒提取用） *配制量 500mL

*配置方法 1.量取下列溶液置于 500mL烧杯中。

10％SDS 50mL

2N NaOH 50mL

2.加灭菌水定容至 500mL，充分混匀。

3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。

注意： SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

16、Solution III *组份浓度 3M KOAc，5M CH3COOH （质粒提取用） *配制量 500mL

*配置方法 1.量取下列溶液置于 500mL烧杯中。

KOAc 147g

CH3COOH 57.5mL

2.加入 300mL去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至 500mL。

4.高温高压灭菌后， 4℃保存。

17、0.5M EDTA *组份浓度 0.5M EDTA (pH8.0) *配制量 1L

*配置方法 1.称取 186.1g Na2EDTA.2H2O，置于 1L烧杯中。

2.加入约 800mL的去离子水，充分搅拌。

3.用 NaOH调节 pH 值值 8.0（约 20gNaOH）。

注意：pH 值至 8.0时， EDTA 才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至 1L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。

18、1 M DTT *组份浓度 1M DTT *配制量 20mL

*配置方法 1.称取 3.09gDTT，加入到 50mL塑料离心管内。

2.加 20mL的 0.01 M 的 NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。

3.适量分成小份后， 20℃保存。

19、10mM ATP *组份浓度 10mM ATP *配制量 20mL

*配置方法 1.称取 121mg Na2ATP.3H2O，加入到 50mL塑料离心管内。

2.加 20mL的 25mM TrisHCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份， 20℃保存。