绿豆研究最新进展及未来发展方向

第２６卷第２期　２０１０年６月　金陵科技学院学报　）Ｉ：ＮＡＩ，ＯＦ皿　Ｇ　ＳⅡｒＩ＇Ｉ　’　ＯＦ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　ＶｏＬ　２６，Ｎｏ．２　Ｊｕｎｅ，２０１０　绿豆研究最新进展及未来发展方向　陈　新，袁星星，陈华涛，顾和平，张红梅，崔晓艳，陈　玉　（江苏省农业科学院蔬菜研究所，江苏南京　２１００１４）　摘要：绿豆是我国主要的食用豆类作物之一，在出口创汇和内销中都占有一定的比重。通过综述绿豆种质资源　的收集、优异资源的筛选、主要农艺性状的分子标记辅助育种、遗传图谱的构建与ＱＴＬ定位、基因克隆、生理生　化，以及栽培研究等在国内外的最新研究进展，并对绿豆未来研究的发展方向作一概述，以便为广大科技工作者　提供参考依据。　关键词：绿豆；研究进展　中图分类号：￥５２２　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２～７５５Ｘ（２０１０）０２—００５９—１０　Ｒｅｃｅｎｔ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｆｕｔｕｒｅ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　ＣＨＥＮ　Ｘｉｎ，ＹＵＡＮ　Ｘｉｎｇ—ｘｉｎｇ，ＣＨＥＮ　Ｈｕａ—ｔａｏ，ＧＵ　Ｈｅ—ｐｉｎｇ，　ＺＨＡＮＧ　Ｈｏｎｇ—ｍｅｉ，ＣＵＩ　Ｘｉａｏ—ｙａｎ，ＣＨＥＮ　Ｙｕ　（Ｊｉａｎｇｓｕ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ　２１００１４，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍｕｎｇｂｅａｎ　ｉｓ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｌｅｇｕｍｅ　ｃｒｏｐｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ，ｗｈｉｃｈ　ｐｌａｙｓ　ａｎ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｄｏｍｅｓｔｉｃ　ａｎｄ　ｅｘｐｏｒｔ　ｍａｒｋｅｔｓ．Ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ｇｉｖｅｄ　ａ　ｒｅｖｉｅｗ　ｏｎ　ｍｕｎｇｂｅａｎ’Ｓ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ，　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｄｏｍｅｓｔｉｃ　ａｎｄ　ｆｏｒｅｉｇｎ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，ｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｍａｉｎ　ａｇｒｏｎｏｍｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒ—ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ，ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ　ｇｅ—　ｎｅｔｉｃ　ｌｉｎｋａｇｅ　ｍａｐ　ａｎｄ　ＱＴＬ　ｍａｐｐｉｎｇ，ａｎｄ　ｇｅｎｅ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｅｔ　ａ１．，ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ　ｏｎ　ｍｕｎｇ—　ｂｅａｎ’Ｓ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｉｔ　ａｌｓｏ　ｅｘｐｌｏｒｅｓ　ｍｕｎｇｂｅａｎ’Ｓ　ｆｕｔｕｒｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｍｕｎｇｂｅａｎ；ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　绿豆（Ｖｉｇｎａ　ｒａｄｉａｔａ　Ｌ．）属于豆科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）蝶形花亚科（Ｐａｐｍ０ｎａｃｅａｅ）菜豆族（Ｐｈａｓｅｏｌｅａｅ）豇　豆属（Ｖｉｇｎａ），染色体组为２ｎ＝２２。绿豆原产于中国，在温带、亚热带地区广泛种植。亚洲种植面积较大的　国家有印度、中国、泰国等，美国和澳大利亚的种植面积也在不断扩大。绿豆营养丰富，籽粒中蛋白质含量　高达１９．５　～３３．１　，明显高于禾谷类作物，是小麦面粉的２．３倍、玉米面的３．０倍、大米的３．２倍、小米的　２．７倍。绿豆还是一种抗逆性很强的作物，由于其生育期短、播期弹性大、适应性广；利于用地、养地；而且　经济效益较高等，深受广大农户喜爱。笔者根据国内外绿豆的最新研究进展和动态，分别对国内外绿豆种　质资源的收集、新品种的选育、经典遗传学、分子遗传学，以及生理生化与栽培研究等方面进行综述，以供　广大绿豆科研人员参考。　收稿日期：２０１０～０３—１５　基金项目：食用豆产业技术体系和食用豆行业专项资助（ＮＹＨＹＫＹ０７－－０１７）；国家科技支撑计划出口杂豆品种改良及　产业化示范之绿豆、芸豆品种改良及产业化示范（２０Ｏ６ＢＡＤ０２Ｂ０８－－Ｏ２一Ｏ４）；特色小杂粮新品种选育项目资　助（ｃｘ一０８１０８）　作者简介：陈新（１９７Ｏ一），男，江苏盐城人，副研究员，博士，主要从事豆类作物的遗传育种研究。　６０　金陵科技学院学报　第２６卷　１　国内外绿豆育种研究进展　１．１绿豆种质资源收集及核心种质构建　目前国外的绿豆资源主要保存单位有泰国农业大学农学院、世界蔬菜研究与发展中心（总部位于　漳化）、印度旁遮普农业大学及国家植物资源管理局（ＮＢＰＧＲ）、美国农业部引种站及密苏里大学、日本农　业资源研究所等单位，以上单位累计保存各种绿豆资源３万份左右。国内绿豆资源的主要保存和研究单位　有中国农业科学院作物科学研究所、河北省农业科学院等单位，共保存各类绿豆资源１万份以上［１］。　刘长友等以国家作物种质资源数据库中５　０７２份国内绿豆资源为材料，根据１４个农艺性状，利用地理　来源（省）和性状群进行分组，分别采用比例法、平方根法和多样性指数法确定取样数及聚类选择和随机选　择两种个体选择法构建了１３个不同的绿豆初选核心样本，对不同的取样方法及总资源进行了品种间平均　相似性系数、性状符合度、遗传多样性指数和数量性状变异系数的比较。结果表明，聚类选择取样优于随机　取样，按照性状群分组优于按省分组；在聚类选择条件下采用多样性指数法确定取样数优于平方根法和比　例法。最终确定按性状群分组，利用多样性指数确定取样数，聚类选择个体为绿豆核心种质构建的最佳方　案。用此方案，构建了包含７１９份绿豆种质的初选核心种质，取样比例为１４．２　，性状符合度达１００　［２】。Ｉ．　Ｓ．Ｂｉｓｈｔ对来自印度国家资源库的１　５３２份种质进行了各种农艺性状鉴定并筛选出１５２份核心种质Ｌ３］。Ｈ．　Ｋ．ＪＡＩＮ等根据不同绿豆资源分类，把亚洲绿豆分为中国、印度、巴基斯坦、缅甸、阿富汗、马来西亚等几个　中心。　１．２绿豆优异种质资源的筛选　　’程须珍等对国内４　７１９份绿豆品种资源的分布情况和主要农艺性状及部分品种的重要特性进行综合　分析。研究结果表明绿豆品种数量较多的省份依次是河南、山东、山西、河北、湖北、安徽等省。种皮有光泽　的明绿豆和元光泽的毛绿豆各占５Ｏ　。种皮颜色为绿色的品种占９１．５％，另外还有黄色、褐色和蓝色品种。　早熟类型品种主要分布在河南省，大粒型品种以山西、山东、内蒙古、安徽等省较多，河北、安徽、吉林等省　的绿豆资源的单株荚数较多。高蛋白型品种主要在湖北、山东、北京和河北省，高淀粉型品种则在河南、山　东和内蒙古。山西、山东、内蒙古、吉林和湖北等省的绿豆抗旱性较好，山西的品种耐盐性能较好。国外引　进品种比国内绿豆资源抗叶斑病能力强。抗根腐病性较好的品种主要在山东、安徽和河北。内蒙古和山西　的品种较抗蚜虫。程须珍等对来自中国的２５０份黄皮绿豆品种资源的分布情况和主要农艺性状及其部分　品种的重要特性进行综合分析，研究认为黄皮绿豆品种数量较多的省份依次是安徽、山西、湖南、河南、山　东、四川等地，并评选出ＣＯ４７０Ｏ、Ｃ０Ｏ５５９、Ｃ０４６２Ｏ、Ｃｏ３５７４和Ｃ０４３５８等一批特大粒优异种质资源［‘］。　刘旭明等对来自亚蔬的８Ｏ份和国内的７８４份绿豆资源进行了抗豆象鉴定，筛选出Ｖ２７Ｏ９（被害率　５Ｏ　）和Ｖ２８０２（６３．３　）２份中抗豆象亲本材料和（ＶＣ１９７３Ａ×Ｖ２８０２）一３、（ＶＣ２７６８Ａ×Ｖ２８０２）一１、　（ＶＣ３８９０ＡＸＶ２８０２）一３、（ＶＥ２７６８Ａ×Ｖ２７０９）一１和（Ｖ３４７６ｘＴＣ１９６６）等５份免疫材料［５］。韩粉霞等对来　自全国的６６份绿豆资源进行了农艺性状综合评价，筛选出Ｃ０２３２９、Ｃ０４６４０（９Ｏ一４２）、９Ｏ一１、Ｃ０１０１３、　Ｃ００５９１、Ｃ００９４０、Ｃ０４４３６等７份早熟大粒优质资源Ⅲ。李莉等对湖北省３３８份绿豆种质资源的主要农艺性　状进行了调查分析，鉴定和评价了株高、分枝数、单株荚数、单株产量、百粒重等主要数量性状，并对部分种　质资源进行了抗病性鉴定和品质鉴定。结果表明，湖北省绿豆资源在单株量数和单株产量这２个性状上有　丰富的遗传多样性。品质方面，绿豆粗蛋白含量的变异性较大，遗传多样性高，各种质间总淀粉含量差异馨　小，遗传性状相对稳定，但淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例在不同的种质问有一定的差异口　。　国外的研究主要集中在抗盐碱等抗性资源筛选方面。Ｙ．Ｏｈｗａｋｉ等对１０份经过选择的绿豆资源进行　了耐铁缺乏（碱性土壤）的研究，分别鉴定出不抗铁缺乏的品种ＫＰＳ２、ＫＰＳＩ、ＰＳＵ１、Ｐａｇ　ａｓａ一１中抗铁缺　乏的品种ＶＣＩＩ６３Ｂ、高抗铁缺乏的品种ＣＮ３６、ＣＮ６０、ＵＴ１、ＣＮＭ—Ｉ以及非常高抗铁缺乏的品种　ＣＮＭ８５０９Ｂｏ　Ｈ．Ｋ．ＪＡＩＮ根据不同绿豆资源分类，把亚洲绿豆分为中国、印度、巴基斯坦、缅甸、阿富汗、马　来西亚等几个中心　ｓ－。　第２期　陈新，等：绿豆研究最新进展及未来发展方向　１．３绿豆育种研究进展　早期的绿豆新品种选育主要围绕系统选育、国内外引种和人工杂交等常规方法。虽然育种进程比较缓　慢，但是近几十年来，各绿豆主产国在新品种选育中均取得了卓越成效。通过对地方品种资源的评价与鉴　定，分别筛选出了一批优异的新种质，如韩国和日本的黄粒资源、印度的高蛋白和抗病品系、泰国的抗热资　源等。这些新品系均不同程度地解决了当地绿豆育种及生产中存在的一些问题，为绿豆的高产、抗病、优质　提供了一定保障。中国的很多绿豆品种是从上世纪８０年代中国农科院与ＡＶＲＤＣ合作引进的亚蔬绿豆品　种中系选或作为杂交亲本进行杂交选育而成的。关于种间杂交方面，研究认为绿豆和小豆杂交，如果小豆　作为母本，有可能获得杂交种子，反之则不行（图１）。　１．４绿豆农艺性状的遗传研究进展　孙蕾等利用原产于印度的抗豆象栽培绿豆品种Ｖ２７０９与农艺性　状优良的感豆象推广品种中绿１号（Ｖｃ１９７３Ａ）杂交，以杂交种Ｆ　、Ｆ　为试验材料，通过田问农艺性状调查、室内人工接虫鉴定及多元相关　分析等，研究Ｖ２７０９中所包含的抗豆象特性的遗传背景。结果表明　Ｖ２７Ｏ９的抗豆象特性是由一对显性基因控制；通过相关性分析发现　图２－１不抗叶斑病亲本资源　Ｆｉｇ．２－１　Ｐａｒｅｎｔ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ｗｉｔｈ　ｎｏ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　Ｓｉｇａｔｏｋａ　关于绿豆不同数量叶片的遗传研究，Ｒｕｄｉ等研究认为，当长７片叶品种和短５片叶品种杂交，Ｆ。代会　出现９（３片叶片）：３（５片短叶）：４（７片小叶）的分离，并根据后代分离规律推断长７片叶亲本基因型为　６２　金陵科技学院学报　第２６卷　（ｎ　７２　Ｎ。Ｎ。），短５片叶亲本基因型为　（ＮｌＮｌ　２，ｚ２），Ｆｌ代基因型应为Ｎ　．Ｎ２一Ｆ２，代基　因型比例分别为９Ｎ１．Ｎ２．：３Ｎ１．　２，ｚｚ：ｎｌｎ１　２　２　或　，ｚ　Ｎ　．表现出不同的分离比例（图３）［１引。　１．５绿豆分子标记的研究进展　当前绿豆分子遗传学研究主要集中在遗　传多样性及抗性基因的分子标记等方面。程须　珍等采用ＰＣＲ分子标记技术，对１６个绿豆品　种（系）进行了遗传分析。在选用的５６个随机　引物中，发现抗豆象品种与感豆象品种间有一　定差异。根据聚类分析结果将它们分成抗豆象　图２－２叶斑病抗性亲本和病级分类　野生种（ＴＣ１９６６）、抗豆象栽培种（Ｖ２７０９）、抗Ｆｉｇ．２－２　Ｐａｒｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　Ｓｉｇａｔｏｋａ　ａｎｄ　ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　豆象杂交后代（ＶＣ３８９ＯＡ／ＴＣ１９６６—２３）和混合　ｄｉｓｅａｓｅ—ｃｌａｓｓ　类型４个大组。以绿豆抗豆象和感豆象品种及抗豆　三一７　Ｘ　Ｓ－５　象品种×感豆象品种组合的Ｆ群体为试验材料，利　Ⅳ　Ｉ　＾‘／＇１２　：　用ＢＳＡ法，对抗（感）豆象品种池和１个组合Ｆ　的抗　Ｆ．：Ｎ（Ⅳ１＿ⅣＬ）　（感）豆象池进行了鉴定，获得１个共显性标记。经分　Ｉ　析，在抗豆象个体中扩增出了约１．７９　ｋｂ的特异片　Ｆ２：Ｓｅｇｒｅｇａｔｉｎｇ　ｉｎｔｏ　３　ｃｌａｓｓｅｓ　段或２个特异片段（１．７９　ｋｂ／１．０３　ｋｂ）；在感豆象个　３／１６　４／１６　体中仅扩增出约１．Ｏ３　ｋｂ的特异片段。初步认为此　标记与ＴＣ１９６６的抗豆象基因位点紧密联锁，可用　于绿豆抗豆象种质鉴定和遗传育种的分子标记辅助　选择［１。。　。程须珍等利用ＲＡＰＤ标记多态性，在随机　圈　Ⅳｔ一＾ｒＬ　Ⅳ１＿／１２　２　ｎ１　１　２　２　ａｎｄｎｌｎＩ＾Ｌ　选用的４５个引物中找到８个ＲＡＰＤ引物（ＯＰＥ一０１、　ＯＰＥ一０４、ＯＰＥ一０６、ＯＰＥ一０８、ＯＰＥ一０９、ＯＰＥ一１６、ＯＰＥ一　图３绿豆不同数量叶片杂交后代分离比例　１８、０ＰＥ一２Ｏ）在绿豆组植物中能够扩增出不同的谱　一ｌｇ．　　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｈｙｂｒｉｄ　ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ　ｏｆ　ｍｕｎｇｂｅａｎ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　ｌｅａｖｅｓ　带，其中ＯＰＥ一０１和ＯＰＥ一１６为野生绿豆的独特标　记，这些引物中可能存在与抗豆象基因连锁的标记口引。Ｙｏｕｎｇ等以５８个ＴＣ１９６６和感虫栽培种ＶＣ３８９０　的杂交Ｆ　为材料进行ＲＦＬＰ分子标记试验，结果将抗豆象基因（Ｂｒｕｅ）定位在第８连锁群上，并找到了与其　连锁的６个标记，最近的一个标记与目标抗性基因的距离为３．６　ｃＭ　Ｌｌ１］。　马丽萍等通过对抗虫亲本ＴＣ１９６６、感虫亲本绿１号及以中绿１号为轮回亲本经多代回交后获得的３　个近等基因系材料进行抗虫鉴定，结果表明轮回亲本中绿１号的种子被害率＞９Ｏ　，表现为高感（ＨＳ）；抗　性亲本ＴＣ１９６６及３个高代材料种子被害率＜１Ｏ％，表现为高抗（ＨＲ），说明抗虫亲本ＴＣ１９６６中的抗虫基　因呈显性遗传，且能够在后代材料中稳定遗传和表达。该试验利用ＡＦＬＰ分子标记技术对５份试验材料进　行了多态性指纹图谱分析，结果从８３０对ＡＦＬＰ引物组合中筛选出在抗、感虫材料间表现多态性的引物组　合有１００对　引。　刘金华等通过对绿豆ＲＦＬＰ分子标记图中特异片段序列的扩增，建立了一种利用ＰＣＲ方法检测、鉴　定绿豆成份的方法。该方法成功地扩增出了４７０　ｂｐ大小的绿豆特异基因片段，通过对大豆、豇豆等其他豆　类作物的验证，表明该引物具有较强的特异性，可以用来作为食品中绿豆成份的鉴定基因或绿豆转基因检　测中的参照基因ｕ　。　刘长友等通过１２份农艺性状差异较大的绿豆种质对绿豆以及小豆（Ｖｉｇｎａ　ａｎｇｕｌａｒｉｓ）、豇豆（Ｖｉｇｎａ　ｎｇ“ｉｃｕｌａｔｎ）、菜豆（Ｐｈ口ｓｅｏｌ　５　ｖｕｌｇａｒｉｓ）等近缘食用豆中的ＰＣＲ引物进行筛选，结果表明４１对绿豆ＳＳＲ引　物中能够有效扩增的有３５对，６对有多态性；２８对绿ＫＳＴＳ引物中有２３对能够有效扩增，２对有多态性；８　第２期　陈新，等：绿豆研究最新进展及未来发展方向　对小豆ＳＳＲ引物能够有效扩增的有６对，但均无多态性；２７对豇豆ＳＳＲ引物能够有效扩增的有１７对，１对　有多态性；２４对菜豆ＳＳＲ引物能够有效扩增的有９对，１对有多态性　这些多态性引物的获得将有助于中　国绿豆种质资源的遗传多样性分析　］。　孙蕾等利用抗豆象种质Ｖ２７０９与中绿１号杂交后的Ｆ：、ＢＣ　Ｆ　、Ｆ。分离世代群体研究表明，Ｖ２７０９对豆　象的抗性是由单显性基因控制的。为了找到与抗性基因连锁的分子标记，利用６３个随机扩增多态性ＤＮＡ　标记和１１３个ＳＳＲ／ＳＴＳ标记分析群体，结果找到ＯＰＣ一０６和ＳＴＳｂｒ　２２个与抗性基因位点连锁的分子标记。　进一步分析表明，这两个标记与Ｂｒ２位点的遗传距离分别为１１．０　ｃＭ和５．８　ｃＭ　Ｊ。　国外的研究则主要集中在抗病虫方面。Ｋａｇａ等利用４７９个随机引物，分别在抗虫亲本ＴＣ１９６６和感虫　亲本ｏｓａｋａ—ｒｙｏｋｕｔｏ间筛选，得到８个多态性较好且与抗豆象基因连锁的ＲＡＰＤ标记。Ｊａｇｒｕｔｉ　Ｐａｔｍａｉ等对　绿豆种子蛋白进行电泳分析，使用了ｌ１个绿豆基因型检测种子蛋白质标记，以便区分绿豆ＭＹＭＶ抗性和　敏感基因型。结果筛选出ＬＧＧ４６０、Ｊｈａｉｎｍｕｎｇ、０３ＨＣ９Ｏｌ、ＭＧＧ３３２、ＷＧＧ３７和ＰＤＭ８４—１４６等５个抗性蛋　白质标记可用来进行筛选黄色花叶病毒抗性绿豆资源Ｌ１　。　在绿豆白粉病研究方面，Ｙｏｕｎｇ等利用ＶＣ３９８ｏＡ和ＴＣ１９６６的杂交后代进行相关分子标记的筛选，　结果在第３、７、８条染色体上分别筛选出ｓｇＫ４７２、ｍｇＭ２０８、ｍｇＱ３９等３个与抗白粉病相关的分子标记［１　。　Ｃｈａｉｔｉｅｎｇ等利用ＶＣ１２１０Ａ与ＴＣ１９６６配制的杂交组合筛选出Ｍａｃ７１、Ｍａｃ１１４等２个与白粉病紧密相关的　分子标记　。Ｈｕｍｐｈｒｙ等利用ＡＴＦ３６４０与Ｂｅｒｋｅｎ配制的杂交组合，在第１１染色体上发现了代号为　ＬｐＣＳ８２一ＶｒＣＳ７３与白粉病紧密相关的分子标记Ｌ２　。泰国的Ｗａｒａｌｕｋ　Ｋａｓｅｔｔｒａｎａｎ等利用感白粉病品种　ＫＰＳ　１与抗白粉病品种ＶＣ６４６８—１１—１Ａ配制杂交组合，通过重组自交的高代群体（Ｆ　ＲＩＬ）对绿豆抗白粉病　进行了研究，研究结果认为绿豆抗白粉病表现为加性遗传，广义遗传力在０．４８～０．８４之间，狭义遗传力在　０．４８～Ｏ．６８之间，单株结荚和百粒重这２个农艺性状和抗白粉病成负相关，同时建立了２个平均长度为　１５．６　ｃＭ的遗传连锁图，在Ａ连锁群上定位了ＤＴＬＭＢ１１４和ＤＴＬＭＢ６８　２个ＱＴＬ，在Ｂ连锁群上定位了　ＤＴＬＭＢ２３８　１个ＱＴＬ（图４）Ｅ。　。　１．６绿豆遗传图谱构建与ＱＴＬ定位研究进展　构建绿豆遗传连锁图谱、定位目标基因将大幅度提　ＬｉｎｋａｇｅＡ　Ｌｉｎｋａｇｅ　Ｂ　高了分子标记辅助选择的效率，缩短育种进程，并进一　步为基因精细定位、图位克隆、分子定向修饰育种等工　作奠定了基础。梅丽等对不同年份、不同地区种植的绿　豆进行接虫鉴定分析表明，野生种绿豆ＡＣＣ４１中的抗豆　象主效基因在不同环境下能稳定存在，是进一步精细定　：　ｌ，７—　６１８１４９１　。。。　位的理想目标［２引。以上研究均为抗豆象目标基因的精细　定位、克隆及标记辅助选择育种等研究奠定了基础。　Ｙｏｕｎｇ等以抗豆象野生绿豆ＴＣ１９６６和感豆象栽培　绿豆ＶＣ３８９Ｏ杂交后代的５８个Ｆ。单株，利用１５３个ＲＦＬＰ　标记构建了绿豆遗传连锁图，该图谱共包含１４个连锁　群，总长度为１　２９５　ｃＭ，标记间平均遗传距离为９．３　ｃＭ　Ｌ１　。Ｌａｍｂｒｉｄｅｓ等利用抗豆象野生种ＡＣＣ４１及栽培　种Ｂｅｒｋｅｒｎ的后代群体构建了两套绿豆遗传连锁图谱，　图４定位在连锁群Ａ、Ｂ上的抗白粉病ＱＴＬ　Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｐｏｗｄｅｒｙ　ｍｉｌｄｅｗ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ＱＴＬ　ｐｏｓｉ—・　ｔｉｏｎｅｄ　ｏｎ　ｌｉｎｋａｇｅ　ｇｒｏｕｐ　Ａ　ａｎｄ　Ｂ　其中利用６７个Ｆ　单株构建的连锁图共有１ｌＯ个标记，包　括５２个ＲＦＬＰ，５６个ＲＡＰＤ标记以及种皮色和组织着色　２个性状标记，这些标记共分１２个连锁群，总长度为　７５８．３　ｃＭ；而以ＲＩＬ群体（该ＲＩＬ来自于上述６７个Ｆ　单株）构建的连锁图谱总长度为６７１．９　ｃＭ，仅包含了　１１５个ＲＡＰＤ标记，也分布在１２个连锁群中，其中大部分ＲＡＰＤ标记的顺序在两套连锁图中比较吻合，但　有些标记的偏分离较高，而且标记间的平均遗传距离比较远，不同图谱中难以整合在一起　。Ｈｕｍｐｈｒｙ　６４　金陵科技学院学报　第２６卷　等也采用Ｌａｍｂｒｉｄｅｓ的ＲＩＬ群体构建了绿豆遗传连锁图，总长度为７３７．９　ｃＭ，包含１３个连锁群、ｇ５５个　ＲＦＬＰ标记，标记间的最短距离为３．０　ｃＭ　Ｌｚ¨。虽然上述连锁群的绘制主要源于目标基因的定位研究，所用　标记及亲本问的差异，有很多标记难以整合在一起，但是这些研究均为绿豆分子遗传学的深入研究奠定了　基础。　遗传连锁图谱的构建除了用于基因定位分析外，还可用于比较基因组学研究。Ｙｏｕｎｇ等通过构建遗　传连锁图谱，在第８连锁群上发现１个ＲＦＬＰ标记距野生绿豆ＴＣ１９６６中的抗豆象基因仅３．６　ｃＭＥｎ］。Ｋａｇａ　和Ｉｓｈｉｍｏｔｏ利用ＢＳＡ法分析，将可能与抗豆象基因相关的ＲＡＰＤ标记制备成ＲＦＬＰ探针进行进一步分析，　也发现了６个与ＴＣ１９６６抗豆象基因连锁较紧密的标记［１　。Ｈｕｍｐｈｒｙ等还以高抗白粉病的印度绿豆　ＡＴＦ３６４０与感病品种构建的１４７个重组自交系为材料，利用ＲＦＬＰ标记构建了遗传图谱，该图谱总长为　３５０　ｃＭ，包含了５２个标记位点，并在此基础上开发出１个可解释８６　遗传变异的主效ＱＴＬ，该标记距抗白　粉病基因仅约１．３　ｃＭ［２　。Ｋａｇａ等用ＴＣ１９６６为材料进一步进行ＲＦＬＰ分析，将ＴＣ１９６６的抗豆象基因ｒ定　位在第９连锁群上，同时绘制了该基因的遗传连锁图谱，找到了与其紧密连锁的１３个ＲＦＬＰ标记Ｅ　］。Ｍｉｙａ—　ｇｉ等以抗豆象野生种ＡＣＣ４１和感豆象栽培种ＡＴＦ３６４Ｏ为ＤＮＡ供体、以ｐＢｅｌｏＢＡＣＩＩ为载体建立了第一个　绿豆细菌人工染色体文库，其容量可以涵盖３．５个绿豆基因组。在此基础上，利用ＲＦＬＰ探针与其亚克隆　进行杂交，寻找到２个与抗豆象基因连锁的ＳＴＳ标记ＳＴＳｂｒｌ和ＳＴＳｂｒ２［２引。　１．７绿豆相关基因克隆研究进展　缪建锟等从绿豆叶片提取的总ＤＮＡ中，通过ＰＥＲ方法扩增出３６２　ｂｐ的具有多种抗病、抗虫特性的绿　豆防御素基因。并将其克隆到ｐＧＭ—Ｔｅａｓｙ　ｖｅｃｔｏｒ，酶切图谱及ＤＮＡ测序分析表明克隆的片段包含了完整　的绿豆防御素基因的编码序列。该序列与原序列同源性达到９９．５　，与蛋白质同源性达到１００　。此基因　编码的多肽由７３个氨基酸组成，含有２８个氨基酸的信号肽和８个半胱氨酸，可形成４个二硫键。他们用此　基因构建了高效植物表达载体ｐＢｉｎ４３８一ＬＤ［２引。Ｃｈｅｎ等分离了绿豆Ｈｓｃ７０的ｃＤＮＡ，并进行了ＲＮＡ和蛋　白质表达水平的分析，结果表明该基因主要在正常生长发育过程中起作用，属于组成型表达基因。绿豆激　素诱导的蛋白酶基因的分离及转基因的表达分析表明该基因受生长素特异诱导表达，可能在蛋白质磷酸　化对激素信号传导过程中起重要作用［２　。　１．８绿豆遗传转化研究进展　Ｋ．Ｓ．Ｕｓｈａｒａｎｉ等在绿豆花叶病毒（ｙｅｌｌｏｗ　ｍｏｓａｉｃ　Ｉｎｄｉａ　ｖｉｒｕｓ（ＭＹＭＩＶ））的内含子区域中，表达ＡＶ１　及ＡＶ２基因的ＡＶ启动子和ＡＣ１基因的ＡＣ１启动子位于反方向。将假定启动子的瞬时农杆菌介导释放　构建到烟草及各种豆类中，接着进行报告基因（Ｂ—Ｄ葡萄糖醛酸酶，ＧＵＳ）分析，进而区分ＡＣＩ和ＡＶ基因　的启动子区域对于转录的起始是很有必要的。ＡＶ启动子的转录催化剂蛋白活性及ＡＣ１启动子的差　异对于ＭＹＭＩＶ都是唯一的。ＡＶ启动子是一个复合的核心启动子，由ＴＡＴＡ盒和起始元件（ＴＡＴＡ　如ｒ＋）构成。许多转录因子结合位点在病毒颗粒及互补有义基因的上游启动子序列中得到了区分，这可能　会被用于寄主植物及其病毒的转录研究＿２引。　２　国内外绿豆生理生化及栽培研究进展　２．１绿豆生理生化研究进展　张秀玲用不同浓度的ＮａＣ１、Ｎａ　ＣＯ。和Ｎａ　ＳＯ　盐溶液处理绿豆的种子，对绿豆种子的发芽率、发芽逮　度、发芽指数的影响进行测定分析。结果表明，绿豆在种子萌发出芽阶段表现出较强的耐盐性，在１００￣２００　ｍｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣＩ和Ｎａ　ＳＯ　胁迫下，绿豆种子的发芽率并未受到明显的影响，但显著抑制幼苗生长。在低　浓度Ｎａ　ＣＯ。胁迫下，绿豆种子萌发、幼苗生长均受到明显抑制，说明绿豆不耐碱性盐ＮａｚＣＯｓ。但孟庆俊采　用水培法，通过测定发芽势、发芽率和发芽指数，利用不同浓度的中性盐ＮａＣＩ和碱性盐ＮａｚＣＯｓ对绿豆和　油菜种子萌芽的胁迫效应进行了研究。结果表明ＮａＣ１和ＮａｚＣＯｓ对绿豆种子活力的影响较小，且低浓度的　ＮａＣＩ对种子发芽有促进作用，高浓度的ＮａＣ１对种子发芽才有一定的胁迫效应［２　。　李莉等研究了铅胁迫对绿豆苗期生理生化特性的影响及硒缓解作用。结果表明，铅污染对绿豆的生长　第２期　陈新，等：绿豆研究最新进展及未来发展方向　６５　有一定的毒害作用，且浓度越大，其毒害作用越强。但硒浓度为１０　ｕｇ／ｇ对绿豆生长有利，说明硒在一定程　度上可缓解铅胁迫对绿豆生长的毒害作用Ｌ３　。　徐强等在生长室利用水培研究了不同供硼水平对绿豆生长及矿质营养状况的影响。结果表明缺硼抑　制绿豆生长，对根系的影响比对地上部的影响更大，表现为根冠比变小；供硼水平对植株的矿质营养含量　也有明显的影响，缺硼降低了地上部和根系中的Ｐ、Ｋ、Ｆｅ的含量，促进Ｃａ在根系中的积累，但地上部Ｃａ的　含量降低；缺硼时有利于Ｍｇ在植物体内的累积；硼对Ｍｎ的含量影响不大；严重缺硼时地上部Ｚｎ含量最　高，但供硼正常时，Ｚｎ在根系中含量较高口¨。　范富等采用“３１１一Ｂ”二次回归优化设计，以钼、锌、硼微肥为主要探讨因子进行田间试验，建立了绿　豆优化施肥模型，根据模型得出最高产量的施肥量为：在施尿素（４５　ｋｇ／ｈｍ。）、过磷酸钙（１２０　ｋｇ／ｈｍ　）、硫　酸钾（４５　ｋｇ／ｈｍ。）的基础上，应施钼酸铵２．８８　ｋｇ／ｈｍ。、硫酸锌１Ｏ．５２　ｋｇ／ｈｍ。、硼酸４．５５　ｋｇ／ｈｍ。，此时产量　为１　５４２．１０　ｋｇ／ｈｍ　，各因子对产量影响（包括正反作用）的大小顺序为：钼肥＞硼肥＞锌肥。从单因子效应　方程可以得出，在每公顷施钼肥Ｏ～２．８８　ｋｇ范围内，随施钼量增加产量逐渐提高，之后再增加钼肥投入，　产量则随之下降；锌肥在施０～１０．５２　ｋｇ时，随锌肥量增加，产量逐渐提高；在每公顷施硼肥Ｏ～４．５５　ｋｇ范　围内，随硼肥用量增多，产量逐渐上升，之后继续增加硼肥，产量反而下降　。　卢涛等在生长室利用水培研究了不同供硼水平对绿豆植株形态和生长发育的影响。结果表明，缺硼抑　制绿豆生长，对地下部的影响比对地上部的影响大，冠根比增加；缺硼明显抑制叶面积，比叶面积（ＳＬＡ）下　降；缺硼使叶重比（ＬｗＲ）提高和叶片脉问失绿、变厚、变脆。与适量供硼相比，过量供硼也影响绿豆的生　长，但对冠根比没有影响，过量供硼对植株地上部和地下部具有相同的抑制作用；硼中毒导致成熟叶片过　早脱落，使光合面积变小Ｌ３引。　王鑫等采用了单因素随机区组设计，研究了４种土壤处理除草剂单用及混用对绿豆田绿豆植株的安　全性影响。通过测定绿豆的出苗率、光合速率、蒸腾强度、气孔导度、产量等与生长发育相关的形态和生理　指标，结果表明，处理７（乙草胺７５０　ｍＬ＋丙炔氟草胺１５０　ｇ）对绿豆田有较好的增产效果且对绿豆植株安　全　。　。　Ｓ．Ａｈｍｅｄ等研究了温室条件下的绿豆植物在水涝影响下，叶片中脱落酸（ＡＢＡ）和根系中ＡＣＣ的变　化，以及植物光合速率、叶水势和叶绿素荧光的变化。研究表明在气孔导度、蒸腾速率和ＡＢＡ浓度不发生　变化的情况下，水涝降低了植物的光合速率和水分利用率。如果不增加ＡＢＡ的浓度，光合率迅速减少，叶　绿素荧光的Ｆｖ／Ｆｍ比值降低，说明水涝早期光合速率的降低与脱落酸有关。此外，磷的低回收率，以及Ｐ／　Ｔｒ和Ｆｖ／Ｆｍ值比ＡＢＡ更能说明ＡＢＡ与光合速率的降低没有直接关系。在水涝过程中以及水涝后，ＡＣＣ　的含量会增加，这表明乙烯通过降低光合系统Ⅱ的活力来降低植物的光合速率，即使早期光合速率的降低　与乙烯无关。水涝２　ｄ后，ＡＢＡ含量增加，磷的含量，Ｔｒ值和ｇｓ值迅速减少。则表明ＡＢＡ降低植物的光合　速率与ＡＢＡ有关的生物反应同时进行，如气孔的关闭Ｌ３引。　Ｙｕｎ－Ａｎ　Ｃｈｅｎ等研究光照和木质素等对绿豆生长的影响。研究表明通过连续２　ｄ的日照会减少绿豆　胚轴的生长量，同时影响内生长素ＩＡＡ的浓度，经光照后，绿豆胚轴中过氧化物酶和漆酶的活力会增加，　而且胚轴中的木质素含量也会增加。内生长素ＩＡＡ浓度的降低抑制绿豆胚轴的生长，这是因为ＩＡＡ能降　解阳离子的过氧化物酶。在有光处理的组织中高浓度的木质素可以增加阴离子的过氧化物酶的活力Ｅ３６］。　２．２绿豆栽培相关研究进展　在抗病虫研究方面，孙毅民通过用金斧种衣剂（１：８０、１：１００、ｌ：１２０、１：１５０）和５ｏ　多菌灵可湿粉　包衣处理绿豆种子，结果表明，金斧种衣剂（１：８０、１：１００）在防治绿豆根腐病及提高绿豆产量方面都优于　５Ｏ％多茵灵可湿粉。从应用成本和效果两因素考虑，绿豆生产田应用金斧种衣剂１：１００包衣处理较好。袁　海滨等测定猪毛蒿、黄花蒿、水蒿、大籽蒿４种植物精油对绿豆象成虫的杀虫活性。结果表明，４种植物精油　均对绿豆象有较好的熏杀及触杀活性。其中水蒿精油熏杀ＬＣＳ０为０．０５０　８　ｍｇ／Ｌ、触杀ＬＣ５０为１．５６２　４　ｍｇ／Ｌ，均高于其他３种植物精油［３　。等通过盆栽和大田试验测定了绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｖｉｒｉｄＰ）　Ｔｗ一３菌株对幼苗期绿豆立枯病（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ　ｓｏｌａｎｉ）的生防效果，结果发现Ｔｗ一３菌株可以有效防治绿豆　６６　金陵科技学院学报　第２６卷　立枯病，防治效果分别为８７　～９４　和８１　～９４　，优于多菌灵拌种的防治效果。利用平板法初步研究　Ｔｗ一３对绿豆立枯病菌的作用机制，发现Ｔｗ一３菌株通过菌丝间缠绕，抑制了绿豆立枯病菌的生长，表明重　寄生作用在生物防治中具有重要作用　］。　３国内外绿豆未来研究发展方向　早期的绿豆研究主要集中于常规育种方面，但现代的绿豆育种开始从常规育种向分子育种和常规相　结合的阶段过渡［３　。随着分子标记、转基因技术在绿豆等作物分子育种方面的进一步普及，预计分子技术　在未来绿豆育种尤其是抗病虫育种中将越来越重要。因此，未来的主要研究任务是：　３．１积极开展绿豆分子遗传学相关方面的研究　从国内外的分子遗传学研究现状看，绿豆遗传图谱的标记较少，现有的相关标记饱和度远远不够，重　要基因的精细定位几乎没有开展，标记辅助选择育种体系有待进一步开展及完善［４　引。因此绿豆分子遗传　方面的研究不但前景广阔，且任重而道远。　３．２培育抗病、抗虫、抗除草剂等多抗品种　绿豆内含丰富蛋白质，是许多国家赖以生存的食物之源，培育抗性品种是保证绿豆品质的途径之　一［４４－４ｓ３。由于绿豆象小种可能产生变异，使得抗虫品种逐渐变为感虫品种，这要求我们尽可能将多种抗性　基因累加，培育多价抗虫品种，使其对绿豆象产生较持久的抗性。因此将常规杂交与分子标记技术相结合　有望在今后的鉴定中发挥作用，为今后的绿豆育种工作寻找新的切人点［４　¨。另外，病毒病、白粉病是绿豆　的主要病害，加强相关领域的抗性育种包括抗性资源的筛选、抗性品种的培育也很重要。尤其是把抗病、抗　虫、优质、抗除草剂等多个抗性聚合起来所育成的超级品种具有很好的发展前景Ｌ４　。　３．３强化绿豆营养特性、内在品质和相关加工研究，积极开拓国内和国际市场　加强绿豆保健特性和内在品质的研究，利用现代分子生物学技术探索这些功能成份的作用机理，并培　育保健性能更强的绿豆品种等，以更好地发挥其健康食品的作用。另外，积极开展相关加工技术的研究，主　要包括绿豆芽避免腐烂技术、绿豆复合营养面、绿豆粉丝加工等方面的研究。由于国外绿豆消费量很大而　生产能力不足等原因，导致其价格远高于国内，如加拿大蔬菜市场的绿豆芽零售价是国内的十倍以上，所　以我们应积极争取绿豆出口，扩大国际绿豆消费市场。　４展　望　预计最近几年国内外绿豆的研究发展方向如下：　１）通过常规或分子育种手段选育高产、抗病（主要为病毒病）、抗虫（主要为抗豆象）绿豆新品种。　２）进行绿豆品种资源的筛选工作，结合分子标记进行一些农艺性状的辅助选择研究。　３）进行绿豆的品质育种工作，目前主要集中于抗豆象等方面的研究。　４）有关遗传图谱的构建，基因定位等方面。绿豆分子育种研究的重点：一方面是利用绿豆ＤＮＡ分子　标记进行绿豆种质资源的相关研究，包括优异种质资源的筛选，农艺性状分子标记辅助育种体系的建立，　ＱＴＬ作图研究（￣ｇｉＮＩＬ、ＡＩＬ、ＲＩＬ），ＲＡＰＤ技术转化为ＳＴＳ或ＳＣＡＲ等；另一方面是把来源于不同作物的　抗豆象和其它抗性基因导人到常规栽培绿豆品种中去。　５）绿豆聚合育种的研究。通过转基因技术把多个抗性基因或品质基因导人到同一个绿豆品种中，从　而得到多个抗性和优质高产等优良性状集于一体的“超级品种”。　６）绿豆栽培技术研究主要包括有机栽培技术的研究。　参考文献：　Ｅ１３王丽侠，程须珍，王素华．绿豆种质资源、育种及遗传研究进展［Ｊ］．中国农业科学，２００９，４２（５）：１５１９－－１５２７　Ｅ２３刘长友．程须珍，王素华，等．用于绿豆种质资源遗传多样性分析的ＳＳＲ及ＳＴＳ引物的筛选［Ｊ］．植物遗传资源学报，　２００７，８（３）：２９８—３０２　第２期　陈新，等：绿豆研究最新进展及未来发展方向　６７　［３］Ｂｉｓｈｔ　Ｉ　Ｓ，Ｍａｈａｉａｎ　Ｒ　Ｋ，Ｐａｔｅｌ　Ｄ　Ｐ．Ｔｈｅ　Ｕｓｅ　ｏｆ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　Ｄａｔａ　ｔｏ　Ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｔｈｅ　Ｉｎｄｉａｎ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　Ｃｏｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ｃｒｏｐ　Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，１９９８，４５：ｌｚ７—１３３　［４］程须珍，王索华，田静，等．绿豆优异种质综合评价［Ｊ］．中国农业科学，１９９９，３２（增刊）：３６－－３９　［５３程须珍．中国绿豆科技应用论文集［Ｍ］．北京：中国农业出版社，１９９９：１２一ｌ５　［６］韩粉霞．特早熟优质抗病绿豆新品种豫绿４号口］．中国种业，２００２（６）：５０　［７１李莉，万正煌，黄益勤，等．湖北绿豆地方种质资源鉴定和主要农艺性状评价［Ｊ］．现代农业科学，２００９，１６（１）：３Ｏ一３６　［８］Ｏｈｗａｋｉ　Ｙ，Ｋｒａｏｋａｗ　Ｓ，Ｃｈｏｔｅｃｈｕｅｎ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｔｏ　Ｉｒｏｎ　Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ａｍｏｎｇ　Ｖａｒｉｏｕｓ　Ｃｕｌｔｉｖａｒｓ　ｏｆ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ（Ｖｉｇｎａ　ｒａｄｉａｔａ（Ｌ＿）Ｗｉｌｃｚｅｋ）［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　ａｎｄ　Ｓｏｉｌ，１９９７，１９２（１）：ｌｏ７—１１４　［９］孙蕾，程须珍，王丽侠．绿豆抗豆象研究进展［Ｊ］．植物遗传资源学报，２００７，８（１）：ｌ１３—１１８　［１Ｏ１　Ｓｕｇａｗａｒａ　Ｆ，Ｉｓｈｉｍｏｔｏ　Ｍ，Ｌｅ—Ｖａｎ　Ｎ，ａｔ　ａ１．Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　ｆｒｏｍ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ：ａ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　Ｆａｃｔｏｒ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　Ａｚｕｋｉｈｅａｎ　Ｗｅｅｖｉｌ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９６（４）：３３６Ｏ一３３６４　［１１］Ｙｏｕｎｇ　Ｎ　Ｄ，Ｋｕｍａｒ　Ｌ，Ｍｅｎａｎｃｉｏ—Ｈａｕｔｅａ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．ＲＦＬＰ　Ｍａｐｐｉｎｇ　ｏｆ　ａ　Ｍａｊｏｒ　Ｂｒｕｃｈｉｄ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　Ｇｅｎｅ　ｉｎ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　［Ｖｉｇｎａ　Ｒａｄｉａｔａ（Ｌ．）Ｗｉｌｃｚｅｋ］［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９２，８４：８３９—８４４　［１２］Ｓｏｅｈｅｎｄｉ　Ｒ，Ｓｏｎｔｉｃｈａｉ　Ｓ，Ｔｏｏｊｉｎｄａ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ａｇｒｏｎｏｍｉｃ，ａｎｄ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｌｅａｆｌｅｔ　Ｍｕｔａｎｔｓ　ｉｎ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　（Ｖｉｇｎａ　ｒａｄｉａｔａ（Ｌ．）Ｗｉｌｃｚｅｋ）［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｒｏｐ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００６，１０（３）：１９３—２００　［１３］程须珍，王素华，吴绍宇，等．绿豆抗豆象基因ＰＣＲ标记的构建与应用［Ｊ］．中国农业科学，２００５，３８（８）：１５３４—１５３９　［１４］程须珍，王素华，金达生，等．绿豆抗豆象育种品系综合评价ｌ－Ｊ］．植物遗传资源学报，２００３，４（２）：１１Ｏ—ｌｌ３　［１５１程须珍．中国绿豆产业发展与科技应用［Ｍ］．北京：中国农业科学技术出版社，２００２：７４—８Ｏ　［１６］马丽萍，程须珍，张辉．野生绿豆种质资源ＴＣ１９６６抗豆象基因的ＡＦＬＰ标记研究［Ｊ］．西南农业学报，２００５，８（５）：６２９—　６３３　［１７］刘金华，魏春艳，马立晖．应用ＲＦＬＰ特异基因片段检测绿豆成分［Ｊ］．植物检疫，２００６，２０（６）：３３６—３３８　［１８］Ｋａｇａ　Ａ，Ｉｓｈｉｍｏｔｏ　Ｍ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　Ｂｒｕｅｈｉｄ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　Ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｔｏ　Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ　Ｃｙｃｌｏｐｅｐ—　ｔｉｄｅ　Ａｌｋａｌｏｉｄｓ，ｔｈｅ　Ｖｉｇｕａｔｉｅ　Ａｃｉｄｓ，ｉｎ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ（Ｖｌｇｎａ　ｒａｄｉａｔａ　Ｌ．ｗｉｌｃｚｅｋ）口］．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，１９９８，２５８：３７８—３８４　［１９］Ｙｏｕｎｇ　Ｎ　Ｄ，Ｄａｎｅｓｈ　Ｄ，Ｍｅｎａｎｃｉｏ—Ｈａｕｔｅａ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｍａｐｐｉｎｇ　Ｏｌｉｇｏｇｅｎｉｃ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　Ｐｏｗｄｅｒｙ　Ｍｉｌｄｅｗ　ｉｎ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　ｗｉｔｈ　ＲＦＬＰｓ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９３，８７：２４３—２４９　［２Ｏ］Ｃｈａｉｔｉｅｎｇ　Ｂ，Ｋａｇａ　Ａ，Ｈａｎ　ＯＫ，ｅｔ　ａ１．Ｍａｐｐｉｎｇ　ａ　Ｎｅｗ　ｓｏｕｒｃｅ　ｏｆ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　Ｐｏｗｄｅｒｙ　Ｍｉｌｄｅｗ　ｉｎ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，２００２，１２１：５２１——５２５　［２１］Ｈｕｍｐｈｒｙ　Ｅ，Ｌａｍｂｒｉｄｅｓ　Ｊ，ＭｃＩｎｔｙｒｅ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ（Ｖｉｇｎａ　ｒａｄｉａｔａ）ＲＦＬＰ　Ｌｉｎｋａｇｅ　Ｍａｐ　ａｎｄ　Ｉｔｓ　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｗｉｔｈ　Ｌａｂｌａｂ（Ｌａｂｌａｂ　ｐｕｒｐｕｒｅｕｓ）Ｒｅｖｅａｌｓ　ａ　Ｈｉｇｈ　Ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　Ｃｏｌｉｎｅａｒｉｔｙ　Ｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅ　Ｔｗｏ　Ｇｅｎｏｍｅｓ［Ｊ］．Ｔｈｅ～　ｏｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００２，１０５：１６Ｏ一１６６　［２２］Ｗａｒａｌｕｋ　Ｋ，Ｐｒａｋｉｔ　Ｓ，Ｐｅｅｒａｓａｋ　Ｓ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　Ｐｏｗｄｅｒｙ　Ｍｉｌｄｅｗ　Ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　Ｍｕｎｇｈｅａｎ（Ｖｉｇｎａ　ｒａｄｉａｔａ　（Ｌ．）Ｗｉｌｃｚｅｋ）口］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｒｏｐ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，１２（１）：３７—４２　［２３］梅丽，王素华，王丽侠，等．重组近交系群体定位绿豆抗绿豆象基因［Ｊ］．作物学报，２００７，３３（１０）：１６Ｏ１—１６０５　［２４］Ｌａｍｂｒｉｄｅｓ　Ｃ　Ｊ，Ｉｍｒｉｅ　Ｂ　Ｃ．Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　Ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　Ｂｒｕｃｈｉｄ　Ｓｐｅｃｉｅｓ　Ｃａｌｌｏｓｏｂｒｕｃｈ“ｓ　Ｍａｅｕｌａｔｕｓ（Ｆ），　Ｃ．Ｐｈａｓｅｏｌｉ（Ｇｙｌ　１．），Ｃ．Ｃｈｉｎｅｎｓｕ（Ｌ＿），ａｎｄ　Ａｃａｎｔｈｏｓｃｅｌｉｄｅｓ　Ｏｂｔｅｃｔｕｓ（Ｓａｙ．）（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ：Ｃｈｒｙｓｏｍｅｌｉｄａｅ）．Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ　［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０００，５１（１）：８５—８９　［２５］Ｍｉｙａｇｉ　Ｍ，Ｈｕｍｐｈｒｙ　Ｍ，Ｍａ　Ｚ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ＡｒｔｉｉｆｅｉＭ　Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　Ａｐｐｌｉｃａ．　ｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ＰＣＲ—ｂａｓｅｄ　Ｍａｒｋｅｒ８　Ｃｌｏｓｅｌｙ　Ｌｉｎｋｅｄ　ｔｏ　ａ　Ｍａｊｏｒ　Ｌｏｃｕｓ　Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ　Ｂｒｕｃｈｉｄ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　Ｍｕｎｇ—　ｂｅａｎ（ｒａｄｉａｔａ　Ｌ．ｗｉｌｃｋ）［Ｊ］．Ｔｈｅｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００４，ｌ１０：１５１—１５６　［２６］缪建锟，孙黎，彭晓明，等．绿豆防御素基因的克隆、序列分析和植物表达载体的构建［Ｊ］．石河子大学学报：自然科学　版，２００６，２４（１）：１１２一ｌ１５　［２７］Ｃｈｅｎ　Ｊ　Ｊ，Ｃｈｅｎ　Ｇ　Ｈ，Ｈｓｕ　Ｈ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　Ｄｅｆｅｎｓｉｎ　ＶｒＤ１　ｉｎ　Ｐｉｃｈｉａｐａｓ—　ｔｏｒｉｓ［Ｊ１．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４，５２：２２５６—２２６１　．　［２８１　Ｕｓｈａｒａｎｉ　Ｋ　Ｓ，Ｐｅｒｉａｓａｍｙ　Ｍ，Ｍａｌａｔｈｉ　Ｖ　Ｇ．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａ　Ｂｉｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌ　Ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ｏｆ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　Ｙｅｌｌｏｗ　Ｍｏｓａｉｃ　Ｉｎｄｉａ　Ｖｉｒｕｓ　ｂｙ　Ａｇｒ０ｉｎｆｉＩｔｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｖｉｒｕｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００６，１１９（２）：１５４—１６２　［２９１张秀玲．盐胁迫对绿豆种子萌发的影响口］．北方园艺，２００８（４）：５２—５３　［ｓｏｌ李莉，秦恩华，张熔，等．铅胁迫对绿豆苗期生理生化特性的影响及硒缓解作用［Ｊ］．湖北民族学院学报：自然科学版，　金２００６，２４（１）：９４—９６　陵科技学院学报　第２６卷　［３１３徐强，焦晓燕，王云中，等．硼对绿豆植株生长发育及矿质营养状况的影响［Ｊ］．华北农学报，２００４，１９（１）：８９—９２　［３２３范富，张庆国，张宁，等．旱作绿豆优化施肥对产量及生物性状的影响［Ｊ］．中国农学通报，２００３，１９（５）：４７—５ｏ　［３３］卢涛，徐强，杨利伟．不同供硼水平对绿豆植株形态和生长发育的影响［Ｊ］．干旱地区农业研究，２００７，２５（２）：６７—７６　［３４］王鑫，原向阳，毅，等．除草剂土壤处理对绿豆生长发育及产量的影响口］．杂草科学，２００６（１）：２６—２７　［３５］Ａｈｍｅｄ　Ｓ，Ｎａｗａｔａ　Ｅ，Ｓａｋｕｒａｔａｎｉ　Ｔ．Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　ＡＢＡ　ａｎｄ　ＡＣＣ，ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ　ｔＯ　Ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　Ｗａｔｅｒ　Ｒｅｌａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ（Ｖｉｇｎａ　ｒａｄｉａｔａ（Ｌ．）Ｗｉｌｃｚａｋ　ＣＶ．ＫＰＳ１）ｄｕｒｉｎｇ　Ｗａｔｅｒｌｏｇｇｉｎｇ［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ａｎｄ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｂｏｔａｎｙ，２００６，５７（３）：２７８—２８４　［３６］Ｃｈｅｎ　Ｙ　Ａ，Ｓｈｉｎ　Ｊ　Ｗ，Ｌｉｕ　ｚ　Ｈ．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｌｉｇｈｔ　ｏｎ　Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ　ａｎｄ　Ｌｉｇｎｉｎ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　Ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓｎｓｙｓｕ［Ｊ］．　Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，４０（１）：３３—３９　［３７］孙毅民．金斧种衣剂防治绿豆根腐病的初步研究［Ｊ］．作物杂志，２００６（２）：６８～６９　［３８］，沈永红，刘凤英，等．绿色木霉Ｔｗ一３菌株对绿豆立枯病的生物防治［Ｊ］．河南大学学报：自然科学版，２００７，３７　（６）：６２２—６２５　［３９］Ｌｅｅ　Ｙ　Ｓ，Ｌｅｅ　Ｊ　Ｙ，Ｋｉｍ　Ｄ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ａ　Ｎｅｗ　Ｈｉｇｈ—ｙｉｅｌｄｉｎｇ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　Ｃｕｈｉｖａｒ，“Ｓａｍｇａｎｇ”ｗｉｔｈ　Ｌｏｂｅｄ　Ｌｅａｆｌｅｔ［Ｊ］．Ｋｏｒｅ—　ａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，２００４，３６（３）：ｌ８３—１８４　［４０］Ｃｈｅｎｇ　Ｘ　Ｚ，Ｓｆｉｎｉｖｅｓ　Ｐ，Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｙ．Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ　Ｆｕｒ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔＯ　Ｂｒｕｃｈｉｄｓ（ｃａｎ０ｓ０ｂｒｕｃｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ａｎｄ　Ｃ．ｍａｃｕｌａｔｕｓ）Ｕｓｉｎｇ　ＲＡＰＤ　ｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９６　（４）：４４９—４５６　［４１３　Ｈｕｍｐｈｒｙ　Ｍ　Ｅ，Ｌａｍｂｒｉｄｅｓ　Ｃ　Ｊ，Ｃｈａｐｍａｎ　Ｓ　ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　Ｂｅｔｗｅｅｎ　Ｈａｒｄ－ｓｅｅｄｅｄｎｅｓｓ　ａｎｄ　Ｓｅｅｄ　Ｗｅｉｇｈｔ　ｉｎ　Ｍｕｎｇ－　ｂｅａｎ（Ｖｉｇｎａ　ｒａｄｉａｔａ）Ａｓｓｅｓｓｅｄ　ｂｙ　ＱＴＬ　Ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，２００５，１　２４：２９２－－２９８　［４２］Ｌｉｕ　Ｃ　Ｙ，Ｇｈｅｎｇ　ｘ　ｚ，Ｗａｎｇ　Ｓ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ＳＳＲ　ａｎｄ　ＳＴＳ　Ｍａｒｋｅｒｓ　ｆｏｒ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｍｕｎｇｈｅａｎ　Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅ，２００７，８（３）：２９８—３０２　［４３３程须珍．中国绿豆产业发展与科技应用［Ｍ］．北京：中国农业科学技术出版社，２００２：１１６—１１８　［４４］程须珍．中国绿豆产业发展与科技应用［Ｍ］．北京：中国农业科学技术出版社，２００２：ｌ１９—１２１　［４５３　Ｔａｌｅｋｅｒ　Ｎ　Ｓ．Ｄａｍａｇｅ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｐｅｓｔｓ　ｏｆ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ［Ｍ］．Ｔａｉｗａｎ！Ｐｒｏｃ．ｎｄ　ＡＶＲＤＣ，１９８８：３２９—３４２　［４６］Ｔｏｍｏｏｋａ　Ｎ，Ｌａｉｒｕｎｇｒｅａｎｇ　Ｃ　Ｐ，Ｎａｋｅｅｒａｋｓ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｒｕｃｈｉｄ－ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　Ｌｉｎｅ　Ｕｓｉｎｇ　Ｗｉｌｄ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　ｉｎ　Ｔｈａｉｌａｎｄ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，１９９２，１０９：６Ｏ一６６　［４７］Ｔｏｍｏｏｋａ　Ｎ，Ｋａｓｈｉｗａｂａ　Ｋ，Ｖａｕｇｈａｎ　Ｄ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ　ｏｆ　Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ　Ｗｉｌｄ　Ｓｐｅｃｉｅｓ：Ｓｅａｒｃｈｉｎｇ　Ｆｕｒ　Ｓｏｕｒｃｅｓ　ｏｆ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　Ｂｒｕｃｈｉｄ　Ｂｅｅｔｌｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｇｅｎｕｓ　Ｖｉｇｎａ　Ｓｕｂｇｅｎｕｓ　ＣｅｒａｔｏｔｒｏｐｉｓＥＪ］．Ｅｕｐｈｙｔｉｃａ，２０００，１１５：２７—４１　［４８］Ｍｏｒａｌｅｓ　Ｈ．Ｐｅｓｔ　Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　ｉｎ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ａｇｒｏｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓ：Ｌｅｓｓｏｎｓ　Ｆｕｒ　Ｐｅｓｔ　Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｅｘ—　ｔｅｎｓｉｏｎ［Ｊ］＿Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｐｅｓｔ　Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００２，７（３）：１４５—１６３　［４９］Ｌｉｎ　Ｃ，Ｃｈｅｎ　Ｃ　Ｓ，Ｈｏｒｎｇ　Ｓ　Ｂ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔＯ　ＣａＵｏｓｏｂｒｕｃｈｕｓ　Ｍａｃｕｌａｔｕｓ（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ：Ｂｒｕｃｈｉｄａｅ）ｉｎ　Ｍｕｎｇｂｅａｎ　Ｖａｒｉｅｔｙ　ＶＣ６０８９Ａ　ａｎｄ　ｉｔｓ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ－－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　ＶｒＤＩ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｃｏｎｏｍｉｃ　Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｙ，２００５　（４）：１３６９～１３７３