创作时间：二零二一年六月三十日
琼脂扩散试验之老阳三干创作
创作时间：二零二一年六月三十日 利用可溶性抗原与抗体在半固体琼脂内进行扩散, 若抗原与抗体对应, 而且比例适当, 就会呈现白色沉淀线, 此为阳性反应.琼脂扩散试验可在试管内、平皿中以及玻片上的琼脂中进行.又可分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验两类.
单向琼脂扩散试验 是一种经常使用的定量检测抗原的方法.将适量抗体与琼脂混匀, 浇注成板, 凝固后, 在板上打孔, 孔中加入抗原, 抗原就会向孔的四周扩散, 边扩散边与琼脂中的抗体结合.一按时间后, 在两者比例适当处形成白色沉淀环.沉淀环的直径与抗原的浓度成正比.如事先用分歧浓度的标准抗原制成标准曲线, 则从曲线中可求出标本中抗原的含量.本试验主要用于检测标本中各种免疫球卵白和血清中各种补体成份的含量, 敏感性很高.
双向琼脂扩散试验 是将半固体琼脂倾注于平皿内或玻片上, 待其凝固后, 在琼脂板上打孔, 将抗原、抗体分别注入小孔内, 使两者相互扩散.如果抗原、抗体相互对应, 浓度、比例适当, 则一按时间后, 在抗原、抗体孔之间呈现清晰可见的沉淀线.双向琼脂扩散法可用来分析溶液中的多种抗原.一对立原、抗体系统只能形成一条沉淀线, 分歧的抗原抗体系统在琼脂中扩散的速度分歧, 可在琼脂中形成份歧的沉淀线.本法主要是用于检测血清中各种免疫球卵白、甲胎卵白、乙肝概况抗原等.缺点是需要时间过长, 灵敏度不高.
琼脂免疫扩散试验 资料与试剂
1．琼脂粉 2．平皿 3．打孔器
4．生理盐水或其他缓冲液, 可加1/万的硫柳汞或叠氮钠防腐. 把持方法
1．称取一定量的琼脂粉, 按1%左右（％～1.5%）的比例加入生理盐水或缓冲液, 水浴煮沸融化20min.
2．将融化的琼脂倒入平皿内, 使厚度2mm～3mm.自然冷却.
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3．根据要求（孔径即孔的直径, 孔距即两孔圆心之间的距离, 包括两孔的半径）按模板打孔.也可直接用组合打孔器打孔.现在一般多打成梅花形孔图.
4．挑出孔内琼脂, 注意不要挑破孔缘.
5．在火焰上缓缓加热, 使孔底边缘的琼脂少许熔化, 以封底, 以免加样后液体从孔底渗漏.
6．以毛细滴管吸取样品加入孔内, 注意不要发生气泡, 以加满为度.加少了, 影响反应水平, 加多了, 易溢出, 也影响反应结果.
7．加毕后, 盖上平皿盖, 将平皿翻过来, 置湿盘中, 37℃自由扩散24h～48h. 结果判定
1．用以检测抗原或比力抗原不同时, 将抗血清置中心孔, 将待测抗原或需比力的抗原置于周围相邻孔.若呈现沉淀带完全融合, 证明为同种抗原；若二者有部份相连, 标明二者有共同抗原决定簇；若二条沉淀线相互交叉, 说明二者抗原完全分歧.
中间孔含A,B,C三种抗血清, a、b和a、c为分歧型的抗原（呈双线或交叉）, b、c为同一血清型的分歧亚型（部份融合, 有交叉）
2．用做血清流行病学调查时, 将标准抗原置中心孔, 周围1、3、5孔加标准阳性血清, 2、4、6孔分别加待检血清.待检孔与阳性孔呈现的沉淀带完全融合者判为阳性.待检血清无沉淀带或
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所呈现的沉淀带与阳性对比的沉淀带完全交叉者判为阴性.待检孔虽未呈现沉淀带, 但两阳性孔的沉淀带在接近待检孔时, 两端均内向有所弯曲者判弱阳性.若仅一端有所弯曲, 另一端仍为直线者, 判为可疑, 需重检.重检时, 可加年夜检样的量.
检样孔无沉淀带, 但两侧阳性孔的沉淀带在接近检样孔时变得模糊、消失, 可能为待检血清中抗体浓渡过年夜, 致使沉淀带溶解, 可将样品稀释后重检.
3．用以检测的抗血清的效价时, 将抗原置中心孔, 抗血清倍比稀释后置周围孔, 以呈现沉淀带的血清最高稀释倍数为该抗血清的琼扩效价. 注意事项
1．不规则的沉淀线可能是加样过满溢出、孔型不规则、边缘开裂、孔底渗漏、孵育时没放水平、扩散时琼脂变干燥、温渡过高卵白质变性或未加防腐剂招致细菌污染等所致.
2．抗原抗体的比例与沉淀带的位置、清晰度有关.如抗原过多, 沉淀带向抗体孔偏移和增厚, 反之亦然.可用分歧稀释度的反应液试验后调节.
创作时间：二零二一年六月三十日
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