・１６・ 第２８卷第１期 ２０１０年２月 实 验 与 检 验 医 学 ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＡＮＤ ＬＡＢ０ＲＡＴＯＲＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｖｏ１．２８ Ｎｏ．１ Ｆｅｂ．２０１０ ・论著・ 荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌ＨＥＲ＝２基因扩 增及蛋白表达的对比研究 眭维国 ，欧明林 ，陈洁晶 ，彭红波 ，万友华ｓ，黄河 ，齐曼芳。，戴勇 （１、中国人民第一八一医院中心实验室；２、广西师范大学生命科学学院在读研究生；３、中国人民第一八一医院病 理科．广西桂林５４１００２） 摘要：目的比较桂林市荧光原位杂交法（ＦＩＳｒＩ）￣免疫组织化学法ｆＩＨｃ１检测乳腺癌组织中人表皮生长因子受体（ＨＥＲ一２１基因 扩增及其蛋白表达情况的一致性．探讨ＦＩＳＨ与ＩＨＣ检测乳腺癌ＨＥＲ一２基因状态的临床意义。方法应用ＩＨＣ和ＦＩＳＨ对５Ｏ 例乳腺癌患者ＨＥＲ一２蛋白表达 基因扩增情况及１７号染色体倍体性进行检测，分析ＩＨＣ与ＦＩＳＨ检测ＨＥＲ一２基因状态的差 异以及ＨＥＲ一２蛋白状态与１７号染色体倍体性的相关性。结果ＦＩＳＨ与ＩＨＣ结果总的符合率为８２．０％．两者之间存在较好的 一致性（ｋａｐｐａ＝０．６４０１，ＦＩＳＨ检测ＩＨＣ结果为３＋、２＋和０／１＋者的符合率分别为９２．９％、７０．０％和８Ｏ．８％；ＩＨＣ３＋及２＋者出现ｌ７号 染色体多体性的几率比ＩＨＣ０／Ｉ＋者高ｆ尸＜Ｏ．０５） 结论ＦＩＳＨ可以准确和稳定地检测乳腺癌组织中ＨＥＲ一２的基因状态及ｌ７号 染色体倍体性：ＦＩＳＨ检测１ＨＣ３＋者符合率较高，ＦＩＳＨ与ＩＨＣ的差异主要在于ＩＨＣ２＋和ＩＨＣ０／＋组，ＩＨｃ仅作为检测ＨＥＲ一２基因 状态的初筛方法．而ＩＨＣ结果为２＋或０／１＋者的ＨＥＲ一２基因状态必须应用ＦＩＳＨ进一步确定 关键字：乳腺癌：免疫组织化学法；荧光原位杂交法；ＨＥＲ一２ 中图分类号Ｒ４４６．６１，Ｒ７３７．９，Ｒ７３—３ Ｒ４４６．８ 文献标识码Ａ ｄｏｉＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－１１２９．２０１０．０１．００６ Ｊ Ｃｏｎｔｒａｓｔ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＨＥＲ－２ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙ— 文章编号１６７４—１１２９（２０１０）０１—００１６—０３ ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ Ｓｔ＿／／Ｗｅｉｇｕｏ，ＯＵ Ｍｉｎｇｌｉｎ，ＣＨＥＮ ｔｉｅｒｉｎｇ，ｅｔ ａ１．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１８１ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ儿４，Ｇｕｉｌｉｎ ５４１００２，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｓｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｔｈｅ ｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＩＨＣ）ａｎｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｆＦＩＳＨ１ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｆｏｒ ＨＥＲ一２ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ＨＥＲ－２ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｏｌｙｓｏｍｙ １ ｆ７ ｂｙ ＦＩＳＨ ａｎｄ ＨＥＲ－２ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｔａｔｕｓ ｂｙ ＩＨＣ ｉｎ ５０ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒｓ，ａｎａｌｙｚｅｄ ｔｈｅ ｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｔｗｏ ｔｏｏｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｏｌｙｓｏｍｙ １ ７ ａｎｄ ＨＥＲ－２ ｐｒｏ— ｔｅｉｎ ｓｔａｔｕｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅ ｏｆ ＦＩＳＨ ｉｎ ｔｈｅ ｃａｓｅｓ ｏｆ ＩＨＣ３＋，２＋，０／＋ｗｅｒｅ ９２．９％，７０．０％ａｎｄ ８０．８％ｒｅ－ ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｔｏｏｌｓ ｉｎ ５０ ｃａｓｅｓ ｗａｓ ８２．０％ｆｋａｐｐａ＝０．６４０）．Ｔｈｅ ｐｏｌｙｓｏｍｙ １７ ｗａｓ ｓｔｒｏｎｇｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＨＥＲ一２ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆＰ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ＦＩＳＨ ｉｓ ａ ｖａｌｕａｂｌｅ ｔｏｏｌ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｃｃｕｒａｃｙ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｏｆ ＨＥＲ——２ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＦＩＳＨ ａｎｄ ＩＨＣ ｉｓ ｇｏｏｄ ｉｎ ＩＨＣ３＋ ｃａｓｅｓ。ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｓｃｏｒｄａｎｃｅ ｉｓ ｍａｉｎｌｙ ｉｎ ＩＨＣ２＋ａｎｄ ＩＨＣ０／＋ｃａｓｅｓ．Ｔｈｅ ＩＨＣ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ａ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｃｒｅｅｎ— ｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ，ＦＩＳＨ ｉｓ ｎｅｃｅｓｓａｒｉｌｙ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅ ｔｈｅ ＨＥＲ一２ ｇｅｎｅ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＩＨＣ ２＋ａｎｄ ０／＋． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ；Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔ０ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；ＨＥＲ一２ 在世界范围内．乳腺癌是最常见的妇科肿瘤之 一趋势．该病已逐渐成为威胁我国女性健康的重要恶 性疾病ｌ１．２］ 一些临床研究表明，２０％～３ｏ％￣Ｌ腺癌患 。流行病学调查表明，欧洲和北美发病率较高。我 国乳腺发病率大约为２０／１０万，发病率呈逐年上升 基金项目：本课题受卫生部医药卫生科技发展研究中心科研 者存在ＨＥＲ一２基因扩增或蛋白过表达的情况，其 与乳腺癌的转移、不良预后和复发密切相关ｌ３ 。近 年来．美国ＦＤＡ批准的一种新药Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ可以有 基金资助（基金编号：ＷＫＪ２００７—３－００１） 作者简介：眭维国，男，主任医师，出生于１９６４年，擅长临床 效地提高此类患者的存活率及生活质量，但是该药 肾脏病、医学遗传、分子生物学等。 通讯作者：戴勇。电话：（０７５５）２５５３３０１８—２７８０，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄａｉｙ— ｏｎｇ２２＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｅｌｌ 物仅对基因过表达的患者具有较好治疗效果［Ｓｌ，因 此．明确乳腺癌ＨＥＲ一２基因状态对其治疗和预后 ・１７・ 第２８卷第１期 ２０１０年２月 实 验 与 检 验 医 学 ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＡＮＤ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＶｏＪ．２８ Ｎｏ．１ Ｆｌｅｂ．２Ｏ１Ｏ 有着重要的意义 目前．ＨＥＲ一２状态检测方法包括一些建立于 ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白质水平上的技术，如荧光原位杂 ３ ＦＩＳＨ检测及结果判定ＦＩＳＨ检测按照试剂盒 的操作说明进行，其主要步骤为：从中性固 定石蜡包埋的乳腺癌组织中获取４微米切片，然后 进行样本载玻片的预处理、变性处理、探针与样本杂 交法ｆｎｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ。ＦＩＳＨ）、色素 原位杂交法（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ， 交、玻片洗脱和结果观察。探针是ＧＬＰ探针（位点特 异性探针１．标记红色荧光，对照探针是３ＣＳＰ探针 ｆｌ７号染色体着丝粒探针），标记绿色荧光（图１）。记 ＣＩＳＨ１、聚合酶链式反应法（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ， ＰＣＲ）、免疫组织化学法（ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．ＩＨＣ） 等．其中ＩＨＣ和ＦＩＳＨ是临床上最常用的检测方法。 ＦＩＳＨ的敏感性和特异性较高．普遍认为它是检测 ＨＥＲ一２基因状态的金标准 但是，该法存在设备昂 贵．实验操作步骤繁琐．荧光淬灭较快等缺点， 了其在临床上的普遍应用。ＩＨＣ实验操作简单、实验 结果直观和检测费用较低．是我国目前临床上最常 用的ＨＥＲ一２基因状态检测技术 一些临床研究表 明ＦＩＳＨ和ＩＨＣ具有较高的符合率．但是也存在蛋 白过表达者不出现ＨＥＲ一２基因扩增或无蛋白过表 达者出现ＨＥＲ一２基因扩增等情况 ０１．ＦＩＳＨ和ＩＨＣ 检测ＨＥＲ一２基因状态之间的一致性仍然有待进一 步研究。对此．我们根据本地的实验室条件，应用 ＩＨＣ及ＦＩＳＨ对５０例各期乳腺癌患者的ＨＥＲ一２基 因状态进行了研究．比较ＦＩＳＨ和ＩＨＣ检测ＨＥＲ一２ 基因扩增及其蛋白表达情况的一致性．以及它们的 临床应用价值。为乳腺癌的治疗提供依据 材料与方法 １研究对象选择２００８年６月 ２００９年６月到 中国人民第一八一医院和桂林市中医院进行 乳腺癌诊断和治疗患者５Ｏ例 所有患者均经病理 诊断证实为乳腺癌 研究对象的中位年龄为３７岁 （３０ ７０）岁，男性２例，女性４８例，所有患者均为浸 润性导管癌。ＩＨＣ检测用的试剂盒ｆ兔抗人单克隆抗 体ＨＥＲ一２试剂盒１由福州迈新生物技术开发有限公 司提供；ＦＩＳＨ检测用的试剂盒ｆＨＥＲ一２基因扩增检 测试剂盒）由北京金菩嘉生物有限公司提供．主要仪 器是荧光显微镜ＯＬＹＭＰＵＳ ＢＸ５ １ ２ ＩＨＣ检测及结果判定免疫组化染色方法参照 试剂盒说明书由中国人民第一八一医院和桂 林市中医院病理科按照常规方法进行 ＩＨＣ结果分 为Ｏ～３级：显微镜下细胞膜成棕黄色或棕褐色的为 ＨＥＲ一２蛋白过表达癌细胞。其中细胞膜无着色或小 于３０％细胞中细胞膜着色的为０：癌细胞大于３Ｏ％ 细胞膜不完整、弱染色者为１＋：癌细胞大于３０％细 胞膜轻度至中度完整染色者为２＋：癌细胞大于３０％ 细胞膜完整、强染色者为３＋ 图１ ＦＩＳＨ检测乳腺癌组织ＨＥＲ一２基因状态及１ ７号染色体倍体 性ｆＡ二倍体及ＨＥＲ一２基因阴性，Ｂ多倍体及ＨＥＲ一２基因阳性） 录３０个细胞核中红信号总数以及３０个细胞核中绿 信号总数．如果红信号总数／绿信号总数小于１．８为 阴性结果．大于２．２为阳性结果。提示样本中ＨＥＲ一 ２基因扩增，比例数介于１．８ ２．２之间。则增加计数 细胞至１００个：１７号染色体非整倍体性（ａｎｅｕｓｏｍｙ１ 判断标准：每个细胞中ｌ７号染色体数目平均１．７６～ ２．２５为二倍体性ｆｄｉｓｏｍｙ）．大于或等于２．２６为多倍 体性（ｐｏｌｙｓｏｍｙ）！Ｉ１】 ４统计学方法ＦＩＳＨ与ＩＨＣ检测ＨＥＲ一２基因状 态之间的符合率采用ｋａｐｐａ一致性检验进行分析． ＨＥＲ一２蛋白状态与１７号染色体倍体性之间的相关 性采用Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ Ｅｘａｅｔ Ｔｅｓｔ进行分析 所有计算均采 用ＳＰｓＳ软件进行，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 结果 根据５０例乳腺癌ＩＨＣ结果，分为三组：３＋者１４ 例，２＋者１０例，０／１＋者２６例（ＩＨＣ ０者９例，ＩＨＣ ｌ＋ 者１７例）。在ＩＨＣ３＋、２＋和ｏ／＋者中，ＩＨＣ和ＦＩＳＨ的 符合率分别是９２．９％（１３／１４例）、７０．０％（７／１０例）和 ８０．８％（２１／２６例）。ＩＨＣ与ＦＩＳＨ总的符合率为８２．Ｏ％． ＩＨＣ与ＦＩＳＨ结果之间存在较好的一致性ｆｋａｐｐａ： ０．６４０１．ＩＨＣ检测结果与ＦＩＳＨ检测结果存在的差异 主要在ＩＨＣ ２＋和ＩＨＣ ０，＋组ｆ表１１。 ５Ｏ例乳腺癌标本中．１７号染色体多体在三组中 的发生率分别为６４．３％（９／１４例）、６０．０％（６／１０例）和 ２６．９％（７／２６例），总的发生率为４４．０％（２２／５０例）ｆ表 ２）。１７号染色体的倍体性与免疫组化阳性程度呈正 相关（Ｐ＜Ｏ．０５）。 第２８卷第１期 ２０１０年２月 实 验 与 检 验 医 学 ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＡＮＤ ＬＡＢ０ＲＡＴ０ＲＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｖｏ１．２８ Ｎｏ．１ Ｆｅｂ．２０１０ 表ｌ ＦＩＳＨ检测ＨＥＲ一２基因扩增情况与ＩＨＣ结果比较 表２乳腺癌１７号染色体倍体性与ＨＥＲ一２蛋白表达关系 讨论 临床上，对ＨＥＲ一２状态进行准确的检测．是成 功治疗乳腺癌的关键。目前，利用ＩＨＣ检测ＨＥＲ一２ 蛋白状态和ＦＩＳＨ检测ＨＥＲ一２基因扩增情况是临 床上最常用的ＨＥＲ一２状态检测方法．而且这两种 方法都得到了美国ＦＤＡ的批准 ＩＨＣ实验操作简 便，价格低廉，检测结果直观，普遍应用于我国乳腺 癌ＨＥＲ一２蛋白过表达的检测 与ＩＨＣ对比。虽然 ＦＩＳＨ在临床操作中存在较多的．但是其具有较 高的敏感性和特异性．对准确地测定乳腺癌患者的 ＨＥＲ一２的基因状态有着重要的意义 本研究的目的在于探讨这两种技术在临床检测 中的符合率．而不是比较这两种检测技术的敏感性 和特异性。目前。国内外已经有一些相似研究的报 道，例如，Ｄｏｌａｎ等。对７９例乳腺癌进行了研究，发 现ＦＩＳＨ与ＩＨＣ的符合率仅为７２．９％ｆｌ２Ｊ Ｌａｎ等对 ＩＨＣ检测结果为２＋的病例进行了ＦＩＳＨ检测．发现 ２２１例患者中仅９６例 ４４．４％）存在ＨＥＲ一２基因扩增 ㈣。Ｋｕｏ等对ＩＨＣ及ＦＩＳＨ这两种方法进行了对比． 发现这两种方法存在一定的不符合率ｆＩＨＣ ２＋为 ４６．７％．ＩＨＣ ３＋为１６．７％．ＩＨＣ ２＋及３＋为３０．３％）［ 。 这些研究均表明．ＩＨＣ与ＦＩＳＨ检测ＨＥＲ一２基因状 态之间存在一定比例的不符合率。然而，我们研究 并不是简单地重复前人的工作．因为我们的标本的 陈旧程度以及实验室条件等都与他们存在一定的区 别 我们的研究目的在于回答～个更为简单的问题： 在我们实际的临床检测中ＦＩＳＨ与ＩＨＣ的符合率究 竟是怎么样？ 在我们的研究中．ＦＩＳＨ与免疫组化的检测结果 一致性较好 两种方法检测ＨＥＲ一２基因状态的差 异最主要存在于ＩＨＣ ２十及０／１＋组 ＩＨＣ检测结果的 准确性可能与甲醛固定和石蜡的包埋有关．因为制 备过程会对这些标本的抗原产生负面影响．尽管检 测过程中经过抗原修复步骤．但有时也很难恢复原 始的表达状态 此外．不同厂家生产的试剂的敏感 性和特异性不同以及阅片者的主观判断的差异．都 将直接影响结果的可靠性。在今后的检测中．更严 格地参照美国临床肿瘤协会和美国病理学协会近期 联合制定的乳腺癌ＨＥＲ一２基因临床检测指南 （Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ／Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｔｓ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｉｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ）是非常必要的 此外，本研究同时也 对１７号染色体倍体性进行了检测．发现乳腺癌倍体 性与ＨＥＲ一２蛋白免疫组化阳性程度呈正相关．结 果与陈红等 的研究相似。但是，本研究表明１７号 染色体多倍体也存在７例ＨＥＲ一２蛋白表达为阴性 ｆＩＨＣ ０／＋１者．其中５例同时存在ＨＥＲ一２基因扩增。 这可能与ＩＨＣ检测结果的准确程度有关．也可能与 癌细胞染色体的不稳定性有关。一些研究表明．染 色体非整倍体性是癌细胞普遍存在的遗传学特征之 一．而这种遗传学改变可能与患者不良预后有关．因 此在评价ＨＥＲ一２基因状态的同时应该考虑１７号 染色体数目的变化．可以为临床筛选ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ用药 病例及选择治疗方案提供更多的依据【ｌ５—６３。 综上所述．ＦＩＳＨ不但可以准确和稳定地检测乳 腺癌组织中ＨＥＲ一２基因状态，还可以确定１７号染 色体的倍体性．为临床治疗乳腺癌提供更客观和更 准确的依据 ＩＨＣ仅作为检测ＨＥＲ一２基因状态的初 筛方法．而ＩＨＣ ２＋或０／１＋者的ＨＥＲ一２基因状态必 须应用ＦＩＳＨ进一步确定。 参考文献 【１】Ｐａｒｋｉｎ ＤＭ，Ｂｒａｙ Ｆ，Ｆｅｄａｙ Ｌ ｅｔ ａ１．Ｇ￣ｂａｌ ｃａｎｃｅｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，２００２０］． ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ，２００５，５５（２）：７４－１０８． 【２】Ｚｈｅｎｇ Ｙ，Ｌｉ ＤＬ，Ｘｉａｎｇ ＹＭ ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ ｔｒｅｎｄ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｉｎ Ｓｈａｎｇｈａｉ［Ｊ】．Ｊ Ｓｕｒｇ Ｃｏｎｃｅｐｔｓ Ｐｒａｅｔ，２００１，６： ２１９～２２１． ｆ３】Ｐａｔｅｒｓｏｎ ＭＣ，Ｄｉｅｔｆｃｈ ＫＤ，Ｄａｎｙｌｕｋ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅ— ｅｒｂＢ——２ ａｔｎｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｉｓｋ ｏｆ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｎｏｄｅ—‘ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９１，５１（２）：５５６￣５６７． ｆ４］Ｓｅｓｈａｄｒｉ Ｒ，Ｆｉｒｇａｉｒａ ＦＡ，Ｈｏ￣ｆＭ１ ＤＪ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ ｏｆ ＨＥＲ——２／ｎｅｕ ｏｎｃｏｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｔｈｅ Ｓｏｕｔｈ Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔｕｄｙ Ｇｒｏｕｐ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ，１９９３， １ ｌ（１ ｏ１：１９３６￣１９４２． ［５］Ｐｒｅｓｓ ＭＦ，Ｐｉｋｅ ＭＣ，Ｃｈａｚｉｎ ＶＲ，ｅｔ ａ１．Ｈｅｒ一２／ｎｅｕ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｎｏｄｅ—ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ：ｄｉｒｅｃｔ ｔｉｓｓｕｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｂｙ ｃｏｍｐｕｔｅｒ－ ｉｚｅｄ ｉｍａｇｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗｉｔｈ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｒｉｓｋ ｏｆ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９３，５３（２０）：（下转第４６页） ・４６・ 第２８卷第１期 ２０１０年２月 实 验 与 检 验 医 学 ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＡＮＤ ＬＡＢＯＲＡＴ０ＲＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｖｏ１．２８ Ｎｏ．１ Ｆｅｂ．２０１０ 表１两种方法检测ＡＦＰ结果比较 ） 度高、操作简便、示踪物稳定、标准曲线范围宽．不受 样品自然荧光干扰、无放射性污染、标记物存储时间 长等优点『５．６１。ＴＲＦＩＡ法也有其缺点．如果一次试验 的标准没做好，这一批的结果可能都会受影响．甚至 注：｛与ＥＣＬＩＡ法比较Ｐ＞０．０５； 与正常组比较Ｐ＜Ｏ．０５。 完全出不了结果；ＴＲＦＩＡ法更适合大批量标本检 测。实验表明，ＴＲＦＩＡ法和ＥＣｕＡ法检测ＡＦＰ．高浓 度重复性比低浓度的好，两种方法相比较具有良好 的相关性，重复性和稳定性均较好，国产ＴＲｎＡ分 表２ 两种方法检测ＡＦＰ重复性试验结果比较 幻） 析法其仪器、试剂价格较适中，适用于中小医院开 展。国产ＴＲＦＩＡ分析法试剂盒可应用于临床血清 注： 与ＥＣＬＩＡ法比较Ｐ＞０．０５。 ＡＦＰ的检测 明显差异（ ０．０５）。回收试验结果（表３），ＴＲＦＩＡ法回 参考文献 表３ 时间分辨荧光免疫法测定ＡＦＰ回收实验结果 ［１】张青云，孙丽，张书耕，等．时间分辨荧光免疫法与电化学发光法 检测结直肠肿瘤标志ＣＥＡ的比较阴．世界华人消化杂志，２００５，１３ （２３）：２７９９－２８０２． ［２］潘凌峰，王静．国产ＡＦＰ时间分辨荧光免疫分析试剂盒的方法学 评价叨．江西医学检验杂志，２００７（１）：２０～２１． 收率在９２．３％～１０３．９％。 ［３】宋蓉，杨晓兰，秦媛嫒，等．时间分辨荧光免疫分析法检测甲胎蛋 ３讨论 白的临床应用ＩＪ１．实用医技杂志，２００５，１２（２）． 甲胎蛋白ｆＡＦＰ）是迄今较为肯定的肿瘤标志物． 【４］李倩，高学慧，甘勇，等．电化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋 已广泛用于临床肿瘤诊断，检测已有ＲＩＡ、ＥＩＡ和 白的比较【ＪＪ．中华检验医学杂志，２００１，２１（４）：２４３． ［５】Ｙａｍａｄａ Ｈ，Ｃｈｉｂａ Ｈ，Ａｍａｎｏ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｒａｉｎａｂｏｗ ｔｒｏｕｔ ｅｙｅｄ—ｓｔａｇｅ ＩＲＭＡ等方法。近来发展的时间分辨荧光和电化学 ｅｍｂｒｙｏｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ ｍｅｌａｔｏｎｉｎ ｒｈｙｔｏｎｉｎ ｒｈｙｔｈｍｓ ｕｎｄｅｒ ｌｉｇｈｔ—ｄａｒｋ 发光免疫分析（ＥＣＬＩＡ法１，在固相标记免疫技术上 ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｎｅｗｌｙ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｔｉｍｅ－ｒｅｓｌｏｖｅｄ ｆｌｕｏｍｉｍ－ 属领先地位 。ＴＲＦＩＡ技术是利用镧系元素及其螯 ｍｕｎｏａｓｓａｙ［Ｊ］．Ｇｅｎ Ｃｏｍｐ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，２００２，１２５（１）：４１－４６． 合物为示踪物，标记抗体、抗原、激素、蛋白质、核酸 ［６】Ａｎｄｏｎ Ｔ，Ｎａｇａｓａｗａ Ｈ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｔｉｍｅ—ｒｅｓｌｏｖｅｄ ｆｌｕｏｍｉｍ— 探针及生物细胞。待抗原抗体反应后．用ＴＲＦＩＡ检 ｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ ｉｎｓｕｌｉｎｓ ａｎｄ ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｆｅｅｄｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｂａｒｆｉｎ ｆｌｏｕｎｄｅｒ，Ｖｅｒａｓｐｅｒｍａｓｅｒｉ 测仪器测定反应产物中的荧光强度．判断分析物的 ＩＪｊ．Ｇｅｎ Ｃｏｍｐ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，２００２，ｌ２５（３）：３６５～３７４． 浓度。与传统的ＥＩＡ、ＲＩＡ、ＣＬＩＡ法相比较，具有灵敏 ｆ上接第ｌ８页）４９６０ ４９７０． ［１１］陈红，许建平，马小干，等哥Ｌ腺癌ＨＥＲ２基因表达阳性者１７号染 【６】Ｐｒｅｓｓ ＭＦ，Ｂｅｍｓｔｅｉｎ Ｔｈｏｍａｓ ＰＡ，ｅｔ ａ１．ＨＥＲ－２／ｎｅｕ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｉｆ— 色体倍体性与ＨＥＲ２蛋白表达及Ｉ临床预后因素的相关性分析明． ｃａｔｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：ｐｏｏｒ ｐｒｏｇ－ 重庆医学，２００９，３８（７）：８０３～８０４． ｎｏｓｉｓ ｉｎ ｎｏｄｅ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ，１９９７，１５ 【１２】Ｄｏｌａｎ Ｍ，Ｓｎｏｖｅｒ Ｄ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ａｎｄｆｌｎｏ． （８）：２８９４￣２９０４． ｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ＨＥＲ一２ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｒｏｕｔｉｎｅ 【７】Ｒｏｓｓ ＪＳ，Ｆｌｅｔｃｈｅｒ ＪＡ．Ｔｈｅ ＨＥＲ－２／ｎｅｕ ｏｎｃｏｇｅｎｅ：ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ， ｐｒａｃｔｉｃｅ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ，２００５，１２３（５）：７６６～７７Ｏ． ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｙ￣］．Ｓｅｍｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ，１９９９， 【１３】Ｌａｎ Ｃ，Ｌｉｕ ＪＭ，Ｌｉｕ ＴＷ，ｅｔ ａ１．ｅｒｂ－ｂ２ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓ－ ９（２）：１２５－１３８． ｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｒｅａｄ ａｓ ２＋ｉｎ ｆ８】Ｄｅａｎ—Ｃｏｌｏｍｂ Ｗ，Ｅｓｔｅｖａ ＦＪ．Ｈｅｒ２一ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ：ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ，２００５，１２４（１）：９７－ ｎａｄ ｂｅｙｏｎｄ］Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２００８，４４（１８）：２８０６－２８１２． １０２． 【９】Ｐａｕｌｅｔｔｉ Ｇ，Ｄａｎｄｅｋａｒ Ｓ，Ｒｏｎｇ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ 【１４】Ｋｕｏ ＳＪ，Ｗａｎｇ ＢＢ，Ｃｈａｎｇ ＣＳ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏ－ ｔｉｓｓｕｅ—ｂａｓｅｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＨＥＲ－２／ｎｅｕ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉａｚｔｉｏｎ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ＨＥＲ一２／ｎｅｕ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ Ｔａｌｗａｎｅｓｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｔａｉｗａｎ Ｊ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ，２０００，１８（２１）：３６５１－３６６４． Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｅｏｌ，２００７，２５（１）：１ １８－１４５． 【ｌＯｌ Ｔｕｂｂｓ ＲＲ，Ｐｅｔｔａｙ ＪＤ，Ｒｏｃｈｅ ＰＣ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｓｃｒｅｐａｎｃｉｅｓ ｉｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ 【１５】郭志强，王启鸣，樊青霞，等．色素原位杂交在检测乳腺癌患者组织 ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ ｅｌｉｇｉｂｉｌｉｔｙ ｆｏｒ ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｔｈｅｒａｐｙ：ａｐｐａｒｅｎｔ ｉｍ— 中Ｈｅｒ－２基因的应用 ．中国肿瘤，２００７，１６（５）：３４４～３４７． ｍｕｎｏｈｉｓｔｃｏｈｅｍｉｅａｌ ｆａｌｓｅ—ｐｏｓｉｔｉｖｅｓ ｄｏ ｎｏｔ ｇｅｔ ｔｈｅ ｍｅｓｓａｇｅ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ 【１６】曾碹，梁智勇，武莎斐，等．乳腺癌ＨＥＲ２蛋白表达阳性者的基因 Ｏｎｃｏｌ，２００１，１９（１ ｏ）：２７１４－２７２１． 状态分析［Ｊ】．中华病理学杂志，２００６，３５（１０）：５８４～５８８．
