一般实验室使用，仅用于体外
一步法酵母质粒快速提取试剂盒
一步法快速提取酵母质粒
目录号：DP5001（50次） DP5002（100次）
使用手册
2007年4月，第1版
北京百泰克生物技术有限公司
Bioteke Corporation
一、试剂盒组成、储存、稳定性
试剂盒组成 保存 50次 100次 （DP5001） （DP5002） 裂解液YE 室温 5 ml 10 ml 洗脱缓冲液EB 室温 5 ml 10 ml
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 注意事项
1． 裂解液YE低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，
恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2． 避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖 紧盖子。
3． 操作过程请带手套，一旦有试剂接触到皮肤请立即用水冲洗。
二、原理简介
本试剂盒提供了一种简单快捷的提取酵母质粒的方法，不需要任何破壁酶和玻璃珠，能大大的缩短操作时间，在30分钟左右的时间提取高纯度的酵母质粒DNA。
三、试剂盒特点
1． 不需要破壁酶。 2． 不需要借助玻璃珠破壁。 3． 时间短，方便快捷。
四、注意事项（实验前必须首先阅读这部分！）
1． 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到14，000 rpm的传
统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2． 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
3． 为了最佳效果，最好使用新鲜标本，否则会严重降低产量。
五、操作步骤
1. 用1.5ml的离心管收集菌体，14000rpm离心20秒沉淀菌体(菌液1.5ml
培养24小时左右至OD260达到1-1.5)，倒掉上层液体。
2. 加入100ul的裂解液YE重悬菌体，加入等体积的酚/氯仿（1：1），激
烈旋涡震荡10分钟。
3. 65℃水浴5分钟，期间保持静置，不要摇动。 4. 14000rpm离心5分钟收集上清液。
5. 转移上清（注意不要触动界面物质），并加入2倍体积的95%乙醇，
室温放置5 min后，以12,000 rpm离心5 min，弃尽上清，沉淀用70％无水乙醇洗涤2次，放置真空浓缩仪抽干5 min（或者常温晾干）。 6. 100μl洗脱缓冲液EB溶解沉淀物，于-20℃保存
