肺炎支原体快速鉴定培养基培养结果及分析
目的 探讨肺炎支原体（MP）快速鉴定培养基在MP感染早期的临床诊断价值。 方法 采用MP快速鉴定培养基对本院2009年1月～2011年12月患呼吸道感染的1 620例患者咽拭子标本进行MP培养检测。 结果 本组患者咽拭子标本MP培养阳性共656例，总阳性率40.49％，其中男性阳性率40.85％，女性阳性率40.13％，男女性别比较差异无统计学意义（P > 0.05）；≤2岁儿童阳性率45.95%，3～14岁阳性率31.41%，差异有统计学意义（P 0.05); the positive rate was 45.95% of ≤ 2 year children and 31.41% of 3-14 year old children, the difference was statistically significant (P > 0.05); the positive rate in the season of summer and autumn was lower than that in spring, the difference was all statistically significant (all P > 0.05). Conclusion The rapid identification of medium detection of mycoplasma pneumoniae infection has a higher overall detection rate and a accurate, simple, rapid result, it is a laboratory diagnostic test of choice for MP infection.
[Key words] Mycoplasma pneumoniae; Rapid identification; Medium
肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，MP）介于细菌与病毒之间，属于最小原核细胞型微生物，无细胞壁，可引起致命的呼吸道感染，甚至引起肺外严重并发症，在婴幼儿及青少年间呈区域性流行。近年来MP感染的发病率逐年上升，对儿童的健康造成很大的危害[1]。MP发病初期症状不明显，很难与病毒性和细菌性呼吸道感染相鉴别，有时伴其他并发症更难以确诊本病。MP培养生长缓慢，通常需要21 d，甚至更久，而MP抗体一般在发病后1周出现，导致诊疗延误[2]，但是其用药治疗与细菌性、病毒性感染均不同。因此，快速准确诊断MP在临床上显得特别重要。2009年1月～2011年12月笔者采用MP快速鉴定培养基[3-4]对1 620例急性呼吸道感染患者咽拭子进行培养检测，现将分析结果报道如下：
1 资料与方法 1.1 一般资料
2009年1月～2011年12月在我院门诊及住院的呼吸道感染患者咽拭子标本1 620例，其中男820例，女800例。≤2岁者1 012例，3～14岁者608例。
1.2 方法
本资料采用MP快速鉴定培养基（陕西百盛园生物科技信息有限公司）进行检测，严格按照使用说明书进行操作。①分装冷冻培养基常温复温，使其恢复到液体状态。②无菌的咽拭子在被检患儿咽喉部捻转数次采集分泌物并取出。③无菌状态下打开培养基瓶盖，把棉拭子置于瓶内搅动数次，将拭子在瓶内壁挤压，将尽量多的液体挤到培养基中，除去棉拭子，封闭瓶盖，置于37℃恒温箱中培养24 h。1.3 培养结果判断
培养基颜色由红色变为淡黄色判定为阳性，培养基颜色保持不变或未完全变为清亮的黄色判定为阴性，培养基变为浑浊或生有片状、絮状物的黄色判定为无效，如果条件允许应重新取样培养。
1.4 治疗方法
标本采集均要求在治疗前由医生进行，初步诊断后采用大环内酯类抗生素进行相应的治疗，并在治疗后进行证实诊断。
1.5 统计学方法
采用统计软件SPSS 17.0对实验数据进行分析，计数资料以率表示，采用χ2
检验。以P 0.05），结果见表1。
2.2 不同年龄组MP培养阳性率比较
不同年龄组中，3～14岁组与≤ 2岁组之间MP培养阳性率差异有统计学意义（P < 0.05），结果见表2。
表2 3～14岁组与≤ 2岁组患者MP培养阳性比较 注：与≤ 2岁组比较，*P < 0.05
2.3 不同发病季节MP培养阳性率比较 本组资料研究发现，患儿发病率夏、秋季较冬季低，差异均有统计学意义（均P < 0.05），结果见表3。
表3 不同发病季节MP培养阳性比较 注：与冬季比较，▲P < 0.05 3 讨论
MP是介于病毒、细菌之间的一种微生物，自然界存在广泛，儿童及婴幼儿多数易感，春冬季发病率较高，每隔3～7年会发生一次局部的流行。本病早期单纯通过临床表现不易确诊，主要靠实验室检查[5-6]。除呼吸道感染外，MP尚可通过血行播散或免疫机制引起心肌炎、肾炎、脑炎等多种肺外并发症，严重者甚至危及生命。因MP无细胞壁，所以天然耐受所有β-内酰胺类、甲氧苄啶、磺胺嘧啶等针对病菌细胞壁的抗生素，因此，快速确诊MP感染并及时有效的治疗本病至关重要[7-8]。本研究中笔者使用MP快速鉴定培养基对患者进行咽拭子的检测，在24 h内可取培养结果，在治疗后经证实诊断并进行分析。
本组资料显示，MP肺炎的发病阳性率高达40.49%，比刘宁[9]研究发现的MP肺炎阳性率19.11%～21.19%要明显增高，究其原因，一是该病发病率呈逐年上升趋势，二是本院临床严格要求在治疗前拟诊，应取标本并及时送检。
本文调查结果表明，≤ 2岁儿童发病率高于3～14岁组，前者MP阳生率达45.95%。从发病季节来看，春冬季发病率高于夏秋季，1 620例标本中，春季送检标本阳性率45.12%，夏季32.45%，秋季33.68%，冬季44.25%，夏、秋季阳性率与冬季比较，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。因此，春冬季节我们更应加强MP的预防，降低感染率，临床医师也应注意鉴别本病。
对于MP的检测方法，目前MP实验室诊断金标准是支原体分离培养，此外还有形态学检查、抗体检测和分子生物学方法等。分离培养在培养基上见菌落生长即可确诊，但需一周左右时间，且易受其他病菌影响，阳性率相对较低，故多数用在实验室而非在临床上推广。PCR诊断技术目前已得到较好应用，敏感性和特异性高，但其对仪器环境要求较高，仪器相对昂贵，操作繁琐，且存在一定的假阳性，依然不能满足临床快速诊断的需要[10-11]。所以，目前MP感染的实验室诊断仍然主要依靠血清学检测，主要是通过检测血清MP-IgG及IgM抗体来确诊，其操作方便，时间较短，但是采用本法检测到特异性抗体并不能确定为急性感染期，抗体多在临床症状出现后2～4周最高，且受年龄、免疫功能及个体差异等多个因素的影响，故仍不能对MP感染进行早期诊断[12]。相对于婴幼儿进行血清检测难度更大，一是不易抽取血液标本，二是其免疫系统发育未完善，部分患儿本身免疫功能存在低下，即使感染抗体产生也不足，从而影响检出率。
本研究采用的MP快速鉴定培养基是一种MP选择性的红色液体培养基，其基本原理是培养基中营养充分，MP快速生长增殖，在过程中产生H+使培养基中的pH值降低，则培养基中的指示剂变为黄色[13]。张昊[14]通过MP液体培养法和被动凝集法抗体检测应用比较发现，MP快速液体培养法阳性率为33.06％，
被动凝集法抗体阳性率为38.84％，两种方法符合率为54.5４％，并认为快速液体培养法具有较高的准确性。但培养基有浑浊一般应重新取样，张善弟等[15]对数例引起浑浊变色的培养基取样进行涂片革兰染色镜检，发现多为口腔内的念珠菌引起，为口腔内正常菌群，因此提示在取咽拭子时应尽量不与口腔接触，还建议在培养基中添加抗真菌制剂来避免其他菌群干扰。
综上所述，本研究采用的MP快速鉴定培养法，培养时间短，24 h即可确诊，无需特殊仪器设备，仅取咽部分泌物，不采血，操作简便，特异性强，灵敏度高，适合临床呼吸道患儿早期MP感染的诊断和筛查，MP快速鉴定培养是一种较为理想的诊断MP方法。
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